[发明专利]一种25-羟基维生素D测定试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种25-羟基维生素D测定试剂盒及其使用方法。

背景技术

25-羟基维生素D是一种类固醇激素，在促进肠道中钙的吸收及维持其动态平衡具有重要意义。25-羟基维生素D缺乏已被证实与许多疾病有关，包括骨质疏松，佝偻病，骨软化症及心血管等疾病。但目前所使用的关于25-羟基维生素D测定试剂盒其准确性低，且操作复杂，不易推广。

发明内容

本发明的目的在于提供一种25-羟基维生素D测定试剂盒及其使用方法，其通过胶乳增强免疫比浊法法，操作简单，准确性高，便于推广。

为了达到上述目的，本发明的技术方案是：

一种25-羟基维生素D测定试剂盒，包括第一检测液、第二检测液、稀释液、缓冲液，第一检测液包括β半乳糖苷酶供体肽25-羟基维生素D结合物、第一检测液聚乙二醇，原材料浓度比份为：β半乳糖苷酶供体肽25-羟基维生素D结合物:第一检测液聚乙二醇=（28—32）:（0.8—1.2）；第二检测液包括β半乳糖苷酶受体肽硝基苯-β-半乳糖苷结合物、第二检测液聚乙二醇，原材料浓度比份为：β半乳糖苷酶受体肽硝基苯-β-半乳糖苷结合物:第二检测液聚乙二醇=（13—17）:（0.8—1.2）；稀释液包括鼠抗人维生素D抗体胶乳颗粒、稀释液聚乙二醇，原材料浓度比份为：鼠抗人维生素D抗体胶乳颗粒:稀释液聚乙二醇=（23—27）:（0.8—1.2）；缓冲液包括柠檬酸、柠檬酸三钠、缓冲液聚乙二醇、聚碳酸酯，原材料浓度比份为：柠檬酸:柠檬酸三钠:缓冲液聚乙二醇:聚碳酸酯=（48—52）:（43—47）:（4—6）:（0.8—1.2）。

第一检测液包括β半乳糖苷酶供体肽25-羟基维生素D结合物、第一检测液聚乙二醇，原材料浓度比份为：β半乳糖苷酶供体肽25-羟基维生素D结合物:第一检测液聚乙二醇=30:1；第二检测液包括β半乳糖苷酶受体肽硝基苯-β-半乳糖苷结合物、第二检测液聚乙二醇，原材料浓度比份为：β半乳糖苷酶受体肽硝基苯-β-半乳糖苷结合物:第二检测液聚乙二醇=15:1；稀释液包括鼠抗人维生素D抗体胶乳颗粒、稀释液聚乙二醇，原材料浓度比份为：鼠抗人维生素D抗体胶乳颗粒:稀释液聚乙二醇=25:1；缓冲液包括柠檬酸、柠檬酸三钠、缓冲液聚乙二醇、聚碳酸酯，原材料浓度比份为：柠檬酸:柠檬酸三钠:缓冲液聚乙二醇:聚碳酸酯=50:45:5:1。

第一检测液聚乙二醇、第二检测液聚乙二醇、稀释液聚乙二醇、缓冲液聚乙二醇均为聚乙二醇6000。

一种25-羟基维生素D测定试剂盒的使用方法，包括如下步骤：首先检测样本20μL，稀释液155μL，混合均匀，得到稀释后检测液；接着准备第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管；接着在第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管中分别加入60μL缓冲液，且孵育5分钟；然后在第一试剂管内加入第一检测液240μL，蒸馏水20μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第二试剂管内加入第一检测液240μL，标准液20μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第三试剂管内加入第一检测液240μL，稀释后检测液20μL混合均匀并孵育5分钟；接着在第一试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育12分钟，同时在第二试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育12分钟，同时在第三试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育12分钟；最后分别读取第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出人血清中25-羟基维生素D的浓度。

所述孵育时的温度均为37℃。

本发明的有益效果是：一种25-羟基维生素D测定试剂盒及其使用方法，其通过胶乳增强免疫比浊法法，操作简单，准确性高，便于推广。

具体实施方式

实施例1