[发明专利]一种利用EST-SSR分子标记快速鉴定西瓜品种珍甜1217纯度的方法

说明书

本发明涉及分子标记领域，提供了一种利用EST‑SSR分子标记快速鉴定西瓜品种珍甜1217纯度的方法，该方法采用专门设计的EST‑SSR引物，以珍甜1217基因组DNA为模板进行扩增，通过对扩增结果的特异谱带对待检测珍甜1217的品种纯度进行检测，采用这种方法可以在珍甜1217植株生长的任何时期进行鉴定，能够将杂交种与母本自交种、父本自交种区分开来；准确性高，应用推广前景广阔，为开展西瓜制种和良种的及时销售提供科学依据。

技术领域

本发明涉及分子标记领域，具体提供了一种利用EST-SSR分子标记快速鉴定西瓜品种珍甜1217纯度的方法。

背景技术

珍甜1217是山东省华盛农业股份有限公司最新培育的高品质西瓜品种，易座瓜，开花至成熟28天左右，瓜近圆形，单果重6kg左右。底色绿并覆盖有青黑色条斑，条斑细且清晰度好。皮厚1.0cm，果肉大红色，肉质松脆多汁，含糖量13％左右，品质好，耐热性强，适宜保护地及露地种植。该品种在杂交制种过程中,母本需要人工去雄，授以父本花粉来完成杂交过程，母本去雄不彻底或漏去雄，都将会极大地影响制种纯度。因此鉴定杂交西瓜种子纯度至关重要。

传统的西瓜杂交种子纯度鉴定工作仍然以田间种植鉴定为主，通过成株外观形状比较鉴定，该方法鉴定一般需要2个月，时间长、费用高、难度大且准确性差，需要鉴定人员具有丰富的经验，且易受栽培措施和环境条件的影响，严重影响品种鉴定的效率及准确性，越来越不能满足现代育种工作和生产经营的需要。

室内纯度检验通常采用分子标记技术，该技术从DNA水平上揭示子代与亲本间的遗传差异，不受环境条件和栽培措施的影响，无组织、器官及发育特异性，能够检测微小的变异，不受植株生长季节的限制，多态性丰富、稳定性高，可以大大缩短鉴定时间。EST-SSR(expressed sequence tag-simple sequence repeat)标记，是根据EST序列中的简单串联重复序列开发的一种标记类型，是一类由几个核苷酸为重复单位组成的串联重复序列，根据串联重复单位数目的差异检测多态性。EST-SSR标记具有多态性丰富、共显性遗传、稳定性和重复性较好、对DNA质量要求不高、操作简单易行、不受环境因素影响等优点，与基因组SSR标记相比，EST-SSR标记不仅降低了开发成本、提高了开发效率，而且节省了开发时间，显著提高了其利用价值。因此如何利用该技术实现对珍甜1217纯度的鉴定成为亟待解决的问题之一。

发明内容

本发明的发明人针对上述现有技术的情况，提供了一种利用EST-SSR分子标记快速鉴定西瓜品种珍甜1217纯度的方法，该方法采用专门设计的EST-SSR引物，以珍甜1217的基因组DNA为模板进行扩增，通过对扩增结果的特异谱带对待检测珍甜1217的品种纯度进行检测，采用这种方法可以在珍甜1217植株生长的任何时期进行鉴定，能够将杂交种与母本自交种、父本自交种区分开来；准确性高，应用推广前景广阔，为开展西瓜制种和良种的及时销售提供科学依据。

本发明所针对的西瓜品种为珍甜1217，为了对珍甜1217进行品种纯度的鉴定，获得母本和父本的优良杂交品种，本发明的发明人首先提供了一对EST-SSR引物，命名为ZT1217，其正向序列为5’-TCGGATCTAGGCGAAGGTGGTCG-3’，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；反向序列为5’-GCTCAGGAGGGAGTTTACGGTC-3’，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，

在获得上述引物之后发明人利用其对待测品种珍甜1217的杂交种及其亲本的幼嫩组织基因组DNA进行了扩增，具体过程如下：

(1)提取珍甜1217杂交种及其亲本幼根基因组DNA；

(2)以第(1)步提取的基因组DNA为模板，用EST-SSR引物ZT1217进行PCR扩增：