[发明专利]一种羟丙基壳聚糖取代度的测定方法

权利要求书

1.一种羟丙基壳聚糖取代度的测定方法，包括以下步骤：

⑴干燥羟丙基壳聚糖样品以除去水分，其中，每个羟丙基壳聚糖样品均通过羟丙基化反应和脱碱法纯化制得；

所述干燥羟丙基壳聚糖样品以除去水分的具体干燥方法为：取适量羟丙基壳聚糖样品于离心管中，置于烘箱中在80℃干燥5小时，然后迅速升温至105℃，再干燥1.5小时，干燥完毕后迅速将离心管的盖子合上，放入装有氧化钙的干燥器中备用；

所述脱碱法纯化选自部分中和透析脱碱法：首先将产物混合液抽滤以除去溶剂和残碱，将抽滤后 粗品加水溶解、过滤，于滤液中加入盐酸使滤液被部分中和至 pH10 以上，然后，通过超滤脱碱，同时脱去 NaCl，将滤液减压浓缩，经冷冻干燥或喷雾干燥即得到羟丙基壳聚糖样品；

所述的羟丙基壳聚糖样品来源于脱乙酰度已知的同一原料壳聚糖或脱乙酰度与原料壳聚糖相差不超过3%的壳聚糖；

⑵ 建立检测模型

a. 利用红外吸收光谱仪获得步骤⑴中干燥过的具有不同取代度的羟丙基壳聚糖样品的红外吸收光谱图；

所述利用红外吸收光谱仪获得不同取代度的羟丙基壳聚糖样品的红外吸收光谱图的具体操作为： 压制样品片，取适量 KBr及样品于研钵中，以压制空片的同样步骤压片并检测，其中，样品分别为壳聚糖样品 0 号，取代度依次递增的羟丙基壳聚糖样品 1-5 号，样品加入量为 1-2mg，要求所获得的红外吸收光谱图中绝大多数吸收峰处于30%-100%透光率范围内；

所述利用红外吸收光谱仪获得不同取代度的羟丙基壳聚糖样品的红外吸收光谱图之前，需要进行 背景检测，进行扣背景处理；

所述背景检测的具体操作为：首先，压制空片，取适量 KBr于研钵中，将其研磨至不再有肉眼可 见的小颗粒，以保证压片的均匀度和透明度，研磨完成后，将 KBr 粉末装入试样槽中，摊平，装上其它部件后放入压片机中央，转动螺杆以固定住模具，上下压动手杆，使压力在 12-25MPa 之间，时间控制在 0.5-1min 即可，将已经压好的 KBr 片脱模，用镊子将KBr 片放入红外吸收光谱仪的检测器中进行背景检测；

所述的红外吸收光谱仪为傅里叶变换红外光谱仪；

所述的红外吸收光谱仪的检测条件为：扫描范围 4000-400cm^-1，扫描 16 次，分辨率为4cm^-1；

b. 利用红外吸收光谱仪的应用软件，从a步骤中所得到的红外吸收光谱图测得甲基特征峰2971-2962cm^-1的峰面积的吸光度值A1，以整个波形3020-2500cm^-1的波谷连线为基线BL1，以甲基特征峰的右侧波谷为横向边界RL；测得羟基特征峰3440-3430cm^-1的峰强度的吸光度值A2，以整个峰形3880-1880cm^-1的波谷连线为基线BL2；得到A1与A2的比值X；

c.以标准方法测得a步骤中的羟丙基壳聚糖样品的取代度Y；

所述的标准方法为元素分析法，

所述元素分析法的步骤为：首先，制作标准曲线：以乙酰苯胺作为标准物质，建立质量梯度标准 曲线；然后，分别称取 2-4mg0 号-5 号样品，放入锡舟中，准确称重后将锡舟折叠密封，放入样品 池中进行测定，每个样品做三个平行样，最后结果取平均值，首先通过计算得到壳聚糖样品 0 号的脱乙酰度为 95.1%，然后即可在此基础上计算得到羟丙基壳聚糖样品 1-5 号的取代度 Y；

d. 以b步骤中所得到的比值X对c步骤中所得到的羟丙基壳聚糖样品的取代度Y建立线性良好的回归模型，即Y=kX+b，从而获得模型中k和b的具体数值；

⑶ 检测：将待测羟丙基壳聚糖样品按照步骤⑴的方法干燥，从步骤⑵中a步骤得到红外吸收光谱图，按照步骤⑵中b步骤得到比值X，代入步骤⑵中d步骤所得到的线性回归模型，即可通过计算得到待测羟丙基壳聚糖样品的取代度Y。