[发明专利]空肠弯曲菌酶联免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和免疫学领域，具体涉及一种检测空肠弯曲菌的酶联免疫试剂盒。

背景技术

空肠弯曲菌(campylobacterjejunienteritis)是1973年Butzler等自腹泻病人粪便中分离出来，目前已认识其为人类腹泻的主要致病菌之一。空肠弯曲菌肠炎的发病率在发达国家超过细菌性痢疾，在发展中国家发病率几乎等同于细菌性痢疾。本菌作为重要的食源性致病菌，随着食物进入肠道后在含微量氧环境下迅速繁殖，主要侵犯空肠、回肠和结肠，侵袭肠粘膜，造成充血及出血性损伤，近年来观察到有些菌株能产生类似霍乱肠毒素，引起肠腔内液体分泌增加。

目前空肠弯曲菌的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但国内外目前尚无可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以空肠弯曲菌为检测靶标，所要求保护的技术涉及空肠弯曲菌快速检测产品。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测空肠弯曲菌的试剂盒。

进而，本发明提供了一种用于检测空肠弯曲菌的酶联免疫试剂盒，所述的试剂盒含有：

(a)固相载体，所述的固相载体上包被有作为捕捉抗体的抗空肠弯曲菌单克隆抗体3G2D8H3G9，所述的抗空肠弯曲菌单克隆抗体3G2D8H3G9由小鼠杂交瘤细胞系3G2D8H3G9，CGMCCNo.8766产生；

(b)容器a，所述的容器a中装有作为检测抗体的抗空肠弯曲菌单克隆抗体4C9E1G7H3，所述的抗空肠弯曲菌单克隆抗体4C9E1G7H3由小鼠杂交瘤细胞系4C9E1G7H3，CGMCCNo.8457产生。

在一优选例中，所述的固相载体为酶标反应板。

在另一优选例中，所述的检测抗体带有可检测的标记物。

在另一优选例中，所述的可检测的标记物为辣根过氧化物酶。

在另一优选例中，所述的试剂盒还含有阳性对照和阴性对照。

在另一优选例中，所述的阳性对照为灭活的空肠弯曲菌菌液，所述的阴性对照为灭菌的布氏肉汤。

本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。

附图说明

图1本发明的单克隆抗体的SDS-PAGE电泳图

Lane1：4C9E1G7H3，Lane3：3G2D8H3G9。

具体实施方式

本发明人的研究表明，以空肠弯曲菌作为免疫原，免疫Balb/c小鼠，分离纯化得到两株抗空肠弯曲菌单克隆抗体，即3G2D8H3G9，保藏号CGMCCNo.8766和4C9E1G7H3，保藏号CGMCCNo.8457，上述两株单克隆抗体的抗体效价可达到1:100000，其能够特异性、高效地与空肠弯曲菌结合。以上述单克隆抗体3G2D8H3G9包被酶标反应板作为捕捉抗体，用辣根过氧化物酶标记的上述单克隆抗体4C9E1G7H3作为检测抗体，制作酶联免疫检测试剂盒。结果显示，上述空肠弯曲菌检测试剂盒检测灵敏度达到10⁵cfu/ml，具有重复性、准确性好的优点，孔间误差小于5％，板内CV小于3％。其与单增李斯特、猪霍乱沙门、鼠伤寒沙门、肠炎沙门、福氏志贺、宋内氏志贺、鲍氏志贺、出血性大肠杆菌O157:H7、阪崎肠杆菌、小肠耶尔森氏菌等共计91种细菌均无交叉反应。

在此基础上，本发明人进而根据双抗体夹心酶联免疫法，经过反复测试，终于获得了一种可快速、高效检测食源性空肠弯曲菌的酶联免疫试剂盒。

抗体

本发明包括两株抗空肠弯曲菌单克隆抗体。本发明的两株抗空肠弯曲菌单克隆抗体可以利用小鼠杂交瘤细胞系3G2D8H3G9(CGMCCNo.8766)和小鼠杂交瘤细胞系4C9E1G7H3(CGMCCNo.8457)分别分泌产生。