[发明专利]一种微小卡罗藻的检测方法

权利要求书

1.一种LAMP引物组，其特征在于，所述的引物组包含有：

F3，序列为AAGCATGCCTTCTTCAGTGT、

B3，序列为CTGGAGCAGGCTACGAGT、

FIP，序列为

TGACACACAAACACGCACCCATTGATTTTCATGCCCCTGACG、

BIP，序列为

TGGCCTTTGACGCATTCAGTGTACACAACGAAAGAGACACCG、

LF，序列为GACAGCACCAAGAGAAGACTTG、

LB，序列为TAGCGTCTCCAACGAGCAACT；

所述的FIP的5′端用生物素标记；

所述的LF的5′端用FITC标记。

2.权利要求1所述的引物组在检测微小卡罗藻中的应用。

3.一种检测微小卡罗藻的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含有权利要求1所述的引物组。

4.一种检测有害藻类微小卡罗藻的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤

1)配制LAMP反应体系：

各引物的终浓度为：权利要求1所述的引物组中的FIP和权利要求1所述的引物组中的BIP各1.6μmol/L，权利要求1所述的引物组中的F3和B3各0.2μmol/L，权利要求1所述的引物组中的LF和权利要求1所述的引物组中的LB各0.8μmol/L；缓冲液组成及浓度为：pH 8.8的Tris-HCl 20mmol/L、KCl 10mmol/L，MgSO4 8mmol/L，(NH4)2SO4 10mmol/L，0.1％的Tween20，Betaine 0.8mol/L，dNTPs 1.4mmol/L；8U Bst DNA聚合酶和2μL样品DNA模板，加双蒸水使反应体系总体积为25μL；

2)LAMP反应体系扩增：将配制的所述的LAMP反应体系进行核酸扩增反应，扩增反应所需温度为61℃-65℃，扩增反应所需时间为30min-60min；

3)LFD检测：取8μL核酸扩增产物将产物加入到100μL Buffer中混匀，然后将LFD试纸条垂直浸入混合溶液中显色检测，通过试纸条判断扩增结果。