[发明专利]一种培养基及其应用、方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一种培养基及其应用、方法。

背景技术

社会的进步，加剧了工业及生活污水的排放，大量的含氮、磷的废水进入水体，引发水体中浮游藻类大量繁殖，出现水华现象。当蓝藻爆发时，导致水体中溶解氧下降，鱼虾大量死亡，同时蓝藻的腐败会释放大量的藻毒素，给人们的生命健康带来危害。

藻毒素主要包括肝毒素、神经毒素和脂多糖毒素三类，其中肝毒素毒性最强，微囊藻毒素(MCs)则是出现频率最高，危害最大并且释放量最高的肝毒素种类。微生物降解去除MCs，微生物降解MCs具有成本低、降解彻底、降解范围大等特点，同时不会造成二次污染。

目前，国内外学者正在对MCs的微生物降解方面进行大量研究。应用微生物去除水体中的MCs就要找到可以降解MCs的菌株，但是目前研究都集中在从水体中筛选噬澡菌的研究。

因此，提供一种筛选可以降解MCs的菌株的筛选培养基及筛选方法具有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种培养基及其应用、方法。该培养基及筛选方法以MCs为唯一氮源实现了MCs可降解菌的高效富集和筛选，具有快速、应用范围广、高效等优势。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案

本发明提供了一种培养基，微囊藻毒素(MCs)作为唯一的碳源和氮源。所述MCs可以是MC-RR、MC-LR、MC-YR及其他变式。

在本发明的一些具体实施方案中，所述的培养基中微囊藻毒素的浓度为10～30mon/L。

在本发明的一些具体实施方案中，所述的培养基中微囊藻毒素的浓度为16mol/L。

在本发明的一些具体实施方案中，所述的培养基为无机盐培养基。

在本发明的一些具体实施方案中，1L所述无机盐培养基的配方包括：

本发明还提供了所述的培养基在筛选降解微囊藻毒素的菌株中的应用。

在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的应用中所述菌株的来源为土壤，所述菌株为土著微生物。

在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的应用中所述菌株为蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)。

本发明还提供了一种从土壤中筛选降解微囊藻毒素的菌株的方法，包括如下步骤：

步骤1：采集土壤，在富集培养基中经富集培养，获得富集培养液；

步骤2：取所述富集培养液稀释后，于步骤1至5任一项所述的培养基中进行筛选，获得目的菌株。

在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的方法中，所述富集培养基为LB培养基，配方为：NaCl9.5～10.5g，蛋白胨9.5～10.5g，酵母浸出物4.5～5.5g，无菌水1000mL，pH6.8～7.2。

在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的方法中，所述菌株为土著微生物。

在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的方法中，所述逐步筛选为所述培养基中的微囊藻毒素(MCs)的浓度按照1～2mol/L梯度逐渐增加。

所述培养基中的微囊藻毒素(MCs)的浓度分别为12mol/L、14mol/L、15mol/L、16mol/L、17mol/L、18mol/L、20mol/L、22mol/L。

所述富集培养液稀释具体为梯度稀释，依次配置10^-2,10^-3,10^-4,10^-5,10^-6,10^-7的稀释液。

所述富集培养的条件为：转速150r/min，温度35℃，培养三天。

所述筛选为使用平板涂布的方法将不同浓度的稀释液涂布在固体无机盐培养基上，于培养箱中倒置培养三天，培养温度35℃。选取长势较好的单菌株进行平板划线，进一步纯化。培养基依然采用含有MCs作为唯一碳氮源的固定无机盐培养基，培养基中MCs的含量加到至18mol/L，35℃下倒置培养三天。该步骤反复3-4次，分离出来降解MCs的菌株。

本发明的方法包括如下步骤：