[发明专利]一种毛竹胚乳培养的方法

权利要求书

1.一种毛竹Phyllostachys edulis胚乳培养的方法，其特征在于：由以下步骤组成：外植体的制备和消毒，外植体接种及愈伤组织诱导，愈伤组织的分化成苗，以及壮苗、炼苗和移栽过程，具体步骤如下：

(1)外植体的制备和消毒：对开花毛竹进行人工授粉，于授粉后30-40d取发育饱满的种子，放入存有冰袋的保温箱中冷藏，运至实验室，用4℃预冷的75％乙醇消毒1min；然后用4℃预冷的0.2％的次氯酸钠消毒20-25min，期间不断振荡；最后用4℃预冷的无菌水冲洗5-7遍，用无菌纸吸干表面水分，备用；

(2)外植体接种及愈伤组织诱导：取消毒好的外植体，用镊子小心地剥去内外稃片，然后用镊子轻轻挤压种胚使胚乳挤出，将胚乳接种到愈伤组织诱导培养基上，于4℃冰箱中过夜，次日置于26℃暗培养10-20d使胚乳上形成愈伤组织，每20-30d将愈伤组织在相同培养基上继代一次；愈伤组织诱导培养基是以MS培养基为基础，添加1-5mg/L的2，4-D、0.3-1.0mg/L的ZT、500mg/L的脯氨酸、500mg/L的谷氨酰胺、300mg/L的水解酪蛋白、15g/L的葡萄糖、20g/L的蔗糖、10g/L的麦芽糖、8g/L的琼脂粉，灭菌前调整pH＝5.8；

(3)愈伤组织的分化：将胚乳愈伤组织接种到分化培养基上，26℃光培养20-30d，光照时间12h/d，光照强度1000-1500lux，部分愈伤组织分化成苗，形成再生植株；分化培养基是以MS培养基为基础，添加0.5-2.0mg/L的ZT、0.5-2.0mg/L的IBA、0.5-2.0mg/L的NAA、30g/L的麦芽糖、8g/L的琼脂：

(4)壮苗、炼苗和移栽：将再生的小植株接种到壮苗培养基上培养30-40d，开瓶炼苗5-10d，取出小苗清洗根部的培养基，再用0.1％的高锰酸钾溶液清洗根部，然后将小苗栽植到灭菌的介质中，遮阴散射光培养一个月后，幼苗成活；壮苗培养基是以MS培养基为基础，添加1-4mg/L的NAA、0.2-0.5mg/L的TDZ、8g/L的琼脂、30g/L的蔗糖。