[发明专利]一种人骨髓间充质干细胞的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于医学领域，具体涉及一种人骨髓间充质干细胞的制备方法及其应用。

背景技术

脊柱关节病(Spondyloarthritis，SpA)是一种常见的自身免疫性疾病，其分为中轴型和外周型两类，共同疾病特点主要累及中轴关节及肌腱附着点，以炎性背痛和不对称外周关节炎为主要症状，好发于青年，大多数23～30岁发病，男女比例约为2：1。来自欧洲的报道称脊柱关节病患病率为0.15％-1.8％，我国对12个省、市的120，451汉族人的流行病学调查数据显示脊柱关节病的患病率为0.2％-0.54％。脊柱关节病主要病理特征为自身免疫性炎症和病理性成骨，属高致残性疾病，随着疾病的发展可导致严重的功能障碍，给患者带来了沉重的心理和经济负担，但至今仍无治愈性治疗手段。现有的治疗手段主要包括：1.症状缓解药物(包括非甾体抗炎药(NSAIDs)、糖皮质激素(GC))、2.改善病情抗风湿药物(DMARD)(包括2.1甲氨喋呤(MTX)、2.2柳氮磺胺吡啶(SASP))、3.生物制剂(包括TNF-α拮抗剂)。

但它们均为非治愈性药物，且可造成胃肠道反映、感染，甚至骨髓抑制，肝肾功能异常等严重副作用。正因为现存治疗方法存在以上诸多不足。因此找到一种安全、有效且可改变疾病进程的治疗方法显得尤为重要。

1976年Friedenstein等首次描述骨髓中存在间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSC)并证实其对造血干细胞的增殖和分化具有支持作用。MSC主要存在于全身的结缔组织中，以骨髓的含量最丰富，其具有向中胚层多种组织如骨组织、软骨组织、脂肪组织、肌肉组织甚至神经外胚层的神经组织等分化的潜能。

目前尚未筛选到MSC特有的标记分子，但一致的观点认为SH2、SH3、CD29、CD44、CD71、CD90、CD102等呈阳性，而CD14、CD34和CD45等造血谱系分子表达阴性。由于MSC不表达主要组织相容性复合体(MHC)II分子、CD40、CD80、CD86等共刺激分子，不表达或极低水平表达MHCI，MSC不易被宿主T细胞识别，并能逃脱宿主免疫系统的排斥，因此认为MSC具有低免疫原性，并将其广泛应用于心肌病、肝脏疾病及神经系统疾病中。Strauer等选择18例陈旧性心肌梗死患者，病程5个月～8.5年，经冠状动脉注射自体MSC(间充质干细胞)，3个月后复查时发现梗死区面积减少30％，左心室射血分数升高15％，梗死壁运动速率升高57％，而对照组的以上三个指标与治疗前相比无明显变化。Mohamadnejad等利用MSC治疗4例晚期肝硬化患者，患者平均年龄47岁，且都具有慢性肝衰竭，门脉高压症状，彩超显示患者肝硬化，血清白蛋白、胆红素明显异常，晚期肝病模型(modelforendstageliverdisease,MELD)评分大于16。抽取患者自体骨髓，并培养至细胞量为10.2×10⁶～6.0×10⁶后，用20ml生理盐水混悬细胞，经肘静脉缓慢注射。随访1年发现所有患者均存活，且所有患者均未出现急性肾衰竭、肝脏失代偿加重及肝脏肿块等并发症。其中3例患者的肝功能明显改善，MELD评分下降，并以术后6个月时效果最显著。Mazzini等治疗一组肌萎缩侧索硬化患者，取骨髓培养MSC，溶于2ml自体脑脊液后注射入脊髓，随访3年，无死亡、脑脊髓的容积、结构改变和异常细胞增殖现象发生。