[发明专利]P19/Ebi3复合物及其多克隆抗体在系统性红斑狼疮诊治中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地，本发明涉及P19/Ebi3复合物及其多克隆抗体在系统性红斑狼疮诊断、治疗中的用途。

背景技术

系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus,SLE)是一种严重威胁人类健康与生命的自身免疫性疾病，有较高的致死率和致残率。其病因与发病机制尚不明了，普遍认为是环境因素作用于一定遗传背景的机体(包括组织相容性、细胞因子、细胞因子受体等表达的不同型别)而形成的结果。其免疫病理特征是体内产生多种高低度、致病性自身抗体，同时淋巴细胞凋亡。释放出大量细胞核内容物及核糖小体而成为自身抗原；抗原抗体结合形成免疫复合物，免疫复合物的沉积可导致靶细胞损伤和炎症，导致各个组织和器官发生病变。在该病理过程中，B细胞处于高度活化状态，且该过程与T细胞密切相关，有T细胞依赖性。

复杂的细胞因子网络调节T细胞和B细胞的生长、分化和功能，这些细胞因子可以分为两大类：Th1型(主要诱导细胞免疫)和Th2型(主要促进抗体产生)。白细胞介素12(IL-12)在细胞因子网络调节中起着重要的作用，它主要由单核巨噬细胞分泌产生。IL-12家族由一个α-链(P19，P28或P35)和一个β-链(P40或Ebi3)异二聚体亚基组成(图1)，其与一些自身免疫疾病，尤其是Th1细胞介导的自身免疫病的发病有关。

目前对于系统性红斑狼疮的临床诊断主要依靠临床表现、实验室检查、组织病理学和影像学检查。由于SLE临床表现病症因人而异，有时会出现误诊。而治疗系统性红斑狼疮的常规方法是使用抗疟疾药、抗炎药和免疫抑制药，当症状难以控制时，对非甾体抗炎剂补充以皮质激素；虽然在控制病情、阻止疾病发展中有显著作用，但多有明显不良反应，且对部分患者疗效不佳。B细胞和T细胞在SLE的发病机制中起着重要的作用，针对免疫细胞的生物学疗法将成为治疗SLE的焦点。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可用于系统性红斑狼疮诊治的复合物P19/Ebi3及其多克隆抗体。相比传统的系统性红斑狼疮的诊断和治疗方法，使用多克隆抗体与导致自体抗体过度产生的病理性免疫响应相互作用或将其纠正的特异性治疗将更有优势，如具有较高的特异性与准确性，较低的副作用，从而实现治愈系统性红斑狼疮和/或在长期基础上改善患者的生活品质的病因性治疗。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供了一种分离的P19/Ebi3复合物。

进一步，上面所提到的复合物是由P19和Ebi3两个亚基组成的。

进一步，上面所提到的P19亚基包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的蛋白，或其保守性变异蛋白。

进一步，上面所提到的Ebi3亚基包括如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的蛋白，或其保守性变异蛋白。

进一步，上面所述的亚基是由多核苷酸编码的，所述的P19亚基的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述的Ebi3亚基的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

本发明提供了一种重组载体，它含有上面所述的多核苷酸序列。

进一步，所述的重组载体中还含有与所述的多核苷酸序列操作性相连的表达调控序列。

本发明所述携带基因的载体是本领域已知的各种载体，如市售的载体、包括质粒、粘粒、噬菌体、病毒等。

病毒载体可以是任何适当的载体，包括但不限于逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、疱疹病毒(例如单纯疱疹病毒、痘苗病毒及EB病毒)载体、甲病毒载体。

真核表达载体可以是任何适当的表达载体，包括但不限于pCMV-Myc表达载体、pcDNA3.0表达载体、pcDNA3.1表达载体、pEGFP表达载体、pEFBos表达载体、pTet表达载体、pTRE表达载体、pReceiver-Lv18表达载体、pZE-LV122X表达载体或者在公知表达载体的基础上经改造的载体，比如pBin438、pCAMBIA1301等。

优选地，所述表达载体为真核表达载体。优选地，所述真核表达载体为pReceiver-Lv18和pEZ-LV122X表达载体。

本发明提供了一种宿主细胞，它含有所述的重组载体，或其基因组中整合有所述的多核苷酸。

优选地，所述宿主细胞为CHO细胞。

本发明提供了一种P19/Ebi3复合物的制备方法，它包括下列步骤:

(a)培养所述的宿主细胞；

(b)从培养物中分离出所述的复合物。