[发明专利]Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系及裸鼠移植瘤模型构建方法

说明书

本发明公开了Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系及裸鼠移植瘤模型构建方法。一种Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系，保藏名为Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系GIST‑1210，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号:CCTCC NO:C201502。由Imatinib耐药的胃肠道间质瘤（GIST）组织行原代细胞培养,建立了GIST‑1210耐药细胞系。倒置显微镜下呈互不重叠的单层，细胞生长呈成纤维细胞状，为长梭型。GIST‑1210在药物浓度在0.05‑3µM之间时对细胞系的生长基本没有明显影响，3‑10µM时受到轻度影响。GIST‑1210耐药移植瘤主要由上皮样细胞组成，免疫组化CD117阴性表达。荧光原位杂交（FISH）结果显示GIST‑1210细胞未见KIT或PDGFRA基因扩增。本发明通过建立胃肠道间质瘤Imatinib耐药的细胞系作为平台来揭示GIST的耐药机制、逆转耐药以及开发和评价新的抗癌药物等。

技术领域

本发明属肿瘤生物学领域，主要涉及一种胃肠道间质瘤耐药细胞系。

背景技术

胃肠道间质瘤（gastrointestinal stromal tumor，GIST）是位于胃肠道或腹腔内的表达KIT（CD117）蛋白的间叶源性肿瘤，绝大多数存在KIT基因的功能获得性突变，KIT基因突变在GIST发病过程中发挥关键的作用。Imatinib是一种口服的ATP的竞争性抑制剂，能竞争性地结合于KIT酪氨酸激酶功能区的ATP结合位点，阻断磷酸基团从ATP上转移到蛋白质底物（KIT，PDGFRA，ABL以及BCR-ABL融合蛋白）的酪氨酸残基，从而阻断了失控的信号传导通路，进而阻止细胞的持续增殖，并恢复细胞的正常凋亡程序，是靶向治疗胃肠道间质瘤的重要药物。然而一般在Imatinib平均治疗24个月后，将产生耐药，因此研究肿瘤耐药机制以及防止或逆转肿瘤耐药的发生对于提高靶向治疗效果十分重要。

近年来，肿瘤耐药细胞系己成为重要的工具，大量研究利用它来揭示肿瘤细胞的耐药机制、研究肿瘤细胞的耐药性逆转、开发及评价新的抗癌方法等。

发明内容

本发明提供了一种Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系及裸鼠移植瘤模型构建方法。

本发明根据中性蛋白酶消化原代培养法和/或组织块培养法并作改良，从1例Imatinib治疗失败的胃肠道间质瘤中成功培养出1株Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系，建立了胃肠道间质瘤Imatinib耐药细胞系GIST-1210。

一种Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系，保藏名为Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系GIST-1210，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号: CCTCC NO: C201502，保藏日期：2015年1月22日，地址：湖北省武汉市武汉大学，邮编430072。

所述的GIST-1210的原代细胞在倒置显微镜下呈互不重叠的单层，细胞生长呈成纤维细胞状，为长梭型; GIST-1210在Imatinib药物浓度在0.05-3µM之间时对细胞系的生长基本没有明显影响，3-5µM时受到轻度影响，但在>10µM的高药物浓度下部分细胞的生长受到抑制; GIST-1210细胞系包含KIT基因exon11 Del WK557-558缺失突变和exon14T670I继发点突变；GIST-1210耐药细胞系的移植瘤模型的组织形态学特征：发生耐药后组织形态学和免疫表型均发生了变化，从梭形细胞型变为上皮样细胞型，同时丧失了CD117的表达。

一种采用所述的胃肠道间质瘤细胞系的耐药GIST细胞裸鼠移植瘤模型的构建方法，建立步骤如下：

实验动物BALB /C /nu /nu品系裸鼠，无特殊病原体级, 雌雄不限, 鼠龄3～4周,体重19.0 ± 2.0g；GIST-1210细胞系接种5只裸鼠，均接种于背部皮下；其饲养和实验均在无特殊病原体环境中进行；