[发明专利]一种检测传染性胰脏坏死病毒的方法

说明书

本发明提供一种检测传染性胰脏坏死病毒的方法，所使用的引物，其上下游引物的序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。本发明根据传染性胰脏坏死病毒基因组序列设计了大量引物，从中筛选出可快速有效检测的引物。本发明所使用的引物具有更高的特异性、灵敏度、实用性及便捷性，能有效的对传染性胰脏坏死病毒进行高灵敏的检测。

技术领域

本发明属于水产病害微生物检测技术领域，具体涉及一种检测传染性胰脏坏死病毒的方法。

背景技术

随着社会经济的快速发展，水产养殖业也呈现出养殖规模和养殖技术的空前提高，尤其在集约化养殖和工厂化养殖方面发展迅速，这给人民的生活带来了营养和健康。但在海水经济鱼类的养殖过程中，病毒性疾病的暴发往往会给养殖业带来巨大的危害。传染性胰脏坏死病是由传染性胰脏坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus，IPNV)引起的鱼类传染病，主要危害鲑科鱼类的仔、幼鱼，死亡率达90％以上。发病鱼的特征之一是苗种突然死亡，病鱼首先游动缓慢，动作失调，或顺流漂起，常作垂直回转游动，不久便沉入水底而死。病鱼体色发黑，眼球突出，腹部膨大，腹部及鳍条部充血，鳃呈淡红色，肛门处常托着一条长而较粗的白色黏液粪便。解剖病鱼进行检查，可见有腹水，病鱼胰脏充血，幽门垂出血，组织细胞严重坏死；肝、脾、肾苍白贫血，也有坏死病灶，胃出血，肠道内无食物，而有乳白色透明或淡黄色黏液。因此，及时检测出养殖水体、用具和饲料是否受到传染性胰脏坏死病病毒就非常重要。但目前IPNV的检测方法主要是组织病理技术、电镜技术、细胞培养技术、免疫检测技术和分子检测技术等。这些检测方法在准确性、灵敏性和花费等方面有各自的优点,但是它们不同程度上受到需要专业人员和复杂仪器的限制。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测传染性胰脏坏死病毒的方法，从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供一种检测传染性胰脏坏死病毒的引物，其上下游引物的序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；

作为优选，其下游引物的序列为SEQ ID NO:3。

本发明还提供一种检测传染性胰脏坏死病毒的试剂盒，该试剂盒包含有上述的引物对。

本发明还提供一种检测传染性胰脏坏死病毒的方法，是用于检测水体或饲料中是否感染了传染性胰脏坏死病毒的方法，该方法包括如下的步骤：

1)提取待检测样品的核酸作为检测的模板；

2)将提取的RNA进行反转录制备cDNA；

3)进行检测样品的PCR扩增，反应体系50μL，包含有0.05U/μL的Taq酶、Mg²⁺浓度为2mmol/L的10×PCR Buffer，0.25mmol/L的dNTPs，0.36μmol/L的引物；步骤2)制备的cDNA作为扩增模板；

PCR扩增的反应程序如下：94℃ 5min；94℃ 15s，56℃ 15s，72℃ 15s，25-40个循环；4℃终止反应；

4)产物进行电泳检测，确定是否有目标片段。

其中步骤3)中同时进行阳性对照和阴性对照扩增；阳性对照为携带传染性胰脏坏死病毒核酸片段的质粒，阴性对照为去离子水。

本发明根据传染性胰脏坏死病毒基因组序列设计了大量引物，从中筛选出可快速有效检测的引物。本发明所使用的引物具有更高的特异性、灵敏度、实用性及便捷性，能有效的对传染性胰脏坏死病毒进行高灵敏的检测。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行详细的描述。

实施例1：引物的设计