[发明专利]一种蜂蜜中咖啡因的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于食品检测方法技术领域，尤其涉及一种蜂蜜中咖啡因的检测方法。

背景技术

蜂蜜，是昆虫蜜蜂从开花植物的花中采得的花蜜在蜂巢中酿制的蜜，对人体具有护肤美容、抗菌消炎、促进组织再生、促进消化、提高免疫力、促进长寿、改善睡眠、保肝作用、抗疲劳、促进儿童生长发育、保护心血管、润肺止咳等功效。但目前有报道称蜂蜜中含有咖啡因等有害成分，开发出高效、快捷的检测方法，有助于鉴定蜂蜜的质量，确保食用者的安全。

现有的检测方法是：将蜂蜜用氢氧化钠水溶液稀释后，加入三氯甲烷涡旋提取，离心，收集、过滤提取剂，利用高效液相色谱检测。这个方法存在的缺点在于：1、使用的三氯甲烷和氢氧化钠对人体均具有较大的毒性，同时排放到环境后也会造成很大污染；2、采用涡旋提取，提取不够充分，萃取效果不好，回收率低；3、操作步骤繁琐，对检测人员技术要求较高；4、检测过程需要的样品量和有机试剂量均较大，检测经济型差。

发明内容

本发明针对上述现有技术存在的不足，提供一种蜂蜜中咖啡因的检测方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种蜂蜜中咖啡因的检测方法，步骤如下：

(1)将2.50g蜂蜜溶于20mL、70-80℃的热去离子水，超声溶解5-10min，超声过程中颠倒混匀2-3次；

(2)将步骤(1)完全溶解的蜂蜜放置冷却至20-25℃，采用去离子水定容至25mL；

(3)向50mL离心管中加入1.5mL壬酸，将步骤(2)的蜂蜜溶解液全部倒入离心管中，涡旋混合1min，然后超声提取5-8min，去除下层水相，保留萃取剂；

(4)向步骤(3)得到的萃取剂中加入0.5mL甲醇稀释，并涡旋30s混匀，过0.22μm有机微孔滤膜，采用外标法定容，待检测；

(5)液相色谱检测

仪器条件：

a、色谱柱：C18柱，25cm×4.6mm×5μm

b、流动相：甲醇：水＝1:1

c、流速：1.0mL/min

d、检测波长：273nm

e、进样量：20μL

f、柱温：30℃。

其中，所述的有机微孔滤膜为醇类或酯类有机微孔滤膜。

本发明的有益效果是：

1、本发明采用壬酸作为萃取剂，壬酸极性与咖啡因极为相似，能够极大的提高萃取回收率；同时壬酸的密度比水的密度小，更加方便的分离获取萃取剂；

2、本发明采用涡旋、超声混合萃取技术，能够保证在充分混匀的基础上，更加充分的提取样品中的咖啡因；

3、本方法对检测人员无需接触高毒有机试剂，对人体健康安全有保障，同时对环境友好。

附图说明

图1为咖啡因标准品的液相图谱。

具体实施方式

以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

配制含有咖啡因的混合标准品溶液，向蜂蜜中添加纯度≥99.5％的咖啡因0.025mg/kg(Ⅰ)、0.05mg/kg(Ⅱ)和1.0mg/kg(Ⅲ),添加水平均等于或小于我国的限量标准，每个含量水平重复4次。

实施例1

取上述蜂蜜(Ⅰ)，检测其咖啡因含量，步骤如下：

(1)将2.50g蜂蜜溶于20mL、70-80℃的热去离子水，超声溶解5-10min，超声过程中颠倒混匀2-3次；

(2)将步骤(1)完全溶解的蜂蜜放置冷却至20-25℃，采用去离子水定容至25mL；

(3)向50mL离心管中加入1.5mL壬酸，将步骤(2)的蜂蜜溶解液全部倒入离心管中，涡旋混合1min，然后超声提取5-8min，去除下层水相，保留萃取剂；

(4)向步骤(3)得到的萃取剂中加入0.5mL甲醇稀释，并涡旋30s混匀，过0.22μm有机微孔滤膜，采用外标法定容，待检测；

(5)液相色谱检测

仪器条件：

a、色谱柱：C18柱，25cm×4.6mm×5μm

b、流动相：甲醇：水＝1:1

c、流速：1.0mL/min

d、检测波长：273nm

e、进样量：20μL

f、柱温：30℃。

蜂蜜中咖啡因含量的平均回收率和相对标准偏差RSD见表1。

实施例2

取上述蜂蜜(Ⅱ)，检测其咖啡因含量，步骤如下：