[发明专利]mTOR抑制多肽及其应用

说明书

技术领域：

本发明涉及药物领域，具体涉及用于治疗糖尿病的多肽。

背景技术

糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病，是由于胰岛素不足或胰岛素的细胞代谢作用缺陷所引起的葡萄糖、蛋白质及脂质代谢紊乱的一种综合症。近年来，糖尿病患者的人数逐渐增多，分为I型糖尿病和II型糖尿病。其中II型糖尿病患者的人数占糖尿病总人数的85-90％，严重威胁着病人的健康和生命。如果糖尿病得不到良好的控制，可能引起很多并发症，例如：糖尿病肾病、视网膜病变、高血压等。

目前，大多数患者通过注射胰岛素或者口服降糖药物来帮助控制体内血糖，或调节胰岛素分泌等方法治疗糖尿病。但是这些药物副作用较大，临床上不能长期使用，不能满足糖尿病患者的临床需要。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是最近新出现的细胞内重要信号途径，mTOR主要通过PI3K/Akt/mTOR信号通路磷酸化激活来调控细胞分裂、促进转录、信号翻译等，从而控制蛋白合成来调节细胞生长。mTOR作为一种重要的调节基因通过调节细胞周期、蛋白质合成、细胞能量代谢等多种途径发挥重要的生理功能，在细胞增殖、生长、分化，以及调节动物摄食，调节脂肪代谢等过程中起着中心调控点的作用起着中心调控点的作用。抑制mTOR能有效的抑制心肌细胞的这种异常增殖。美国FDA已经批准雷帕霉素应用于防治冠脉成型术后的再狭窄。最近有学者在小鼠身上建立了使用RNA干扰技术沉默mT0R下游重要调控因子p70S6K的模型，发现p70S6K沉默大大加强了小鼠对胰岛素调节血糖的敏感性。这一发现为胰岛素耐受的糖尿病患者的治疗找到了新的突破口。尽管如此，并没有成熟开发的mT0R抑制多肽问世，用于预防或治疗糖尿病。

发明内容：

本发明目的是针对现有降血糖的药物的特点，设计一种mTOR抑制多肽，能有效治疗糖尿病。

技术方案

一种mTOR抑制多肽，其序列为EIQATWYEKLHEW。所述多肽的在预防或治疗糖尿病中的应用。其用途可通过多种给药方式预防或治疗糖尿病，包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注，口服给药如药丸、胶囊等，鼻喷剂等实现。所述mTOR抑制多肽用于抑制mTOR的活性。

有益结果：

本发明中的mTOR抑制多肽序列EIQATWYEKLHEW，可以靶向抑制mTOR，抑制mTOR受体产生的生理或病理的效应，达到预防或治疗糖尿病的效果。发明人经过大量实验获知mTOR抑制多肽能够抑制体外的细胞活性，以及降低糖尿病模型小鼠的体内血糖。

具体实施方式

本发明涉及多肽由上海生工合成。

实施例1

mTOR抑制多肽的体外细胞活性测定

采用MTT比色法。将对数生长的胰岛瘤细胞(INS-1细胞)，以1.0×105加入96孔培养板中，培养24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物mTOR抑制多肽；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h，每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO，孵育30min，在酶标仪570nm处测定吸光度A值，按公式细胞生长增殖率＝(实验组吸光值/对照组吸光值-1)×100％。计算出实验药物的EC50为20.76nmol/L。

实施例2

mTOR抑制多肽的体内降糖实验

昆明小鼠，高脂高糖喂养至体重18～22g，雌雄各半，实验前禁食不禁水24h，腹腔一次性注射链脲佐菌素(STZ)50mg/kg(1％的柠檬酸盐缓冲液溶解配制)。1周后小鼠尾静脉采血测血糖(BS)，BS高于16mmol/L为造模成功。造模后将小鼠分为3组，每组10只，糖尿病模型组(DM组)：给予等量的PBS缓冲液皮下注射；对照组(拜糖平)：20μg/kg皮下注射给药(溶于0.1mol/LPBS缓冲液)，一天两次，连续15d；样品组(mTOR抑制多肽)：同对照组；另取10只正常小鼠做为空白组。用药后第15d于尾静脉取血快速测量血糖。15d之后，在停药1周后，禁食不禁水16小时进行葡萄糖耐量试验。用25％葡萄糖溶液(2g/kg)灌胃，灌胃后0、120分钟尾静脉取血检测血糖。

结果：葡萄糖转运体蛋白多肽具有降低糖尿病模型小鼠血糖的作用(P<0.05，表1)；同时，可以缓解糖尿病模型小鼠的糖耐量(表2)。其多肽的作用与对照组拜糖平作用相当。

表1mTOR抑制多肽对小鼠降血糖作用

*p<0.05，**p<0.01与模型组相比

表2mTOR抑制多肽对小鼠糖耐量实验结果