[发明专利]A群脑膜炎球菌的培养方法

权利要求书

1.A群脑膜炎球菌的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）制备纯化的工作种子批菌种；

（2）开启工作种子批菌种，接种至半综合培养基中，在温度35～37℃条件下培养16～24小时，然后经过三代扩增培养，制备数量适宜的生产用种子；

（3）将生产用种子接种至发酵罐培养6～12小时即可；发酵罐中培养基为半综合培养基，温度为35～37℃，培养基pH为7.0～7.2，发酵罐中搅拌速度为140～150r/min，接种量为10～15万/ml。

2.根据权利要求1所述的A群脑膜炎球菌的培养方法，其特征在于，所述步骤（1）的具体过程如下：

将A群脑膜炎奈瑟氏球菌菌种接种到纯化培养基上，在38℃条件下培育20h，挑选健壮且无杂菌污染的菌种再接种到纯化培养基上进行二次培养，再在38℃条件下培育12h，挑选健壮且无杂菌污染的菌种加入无菌脱脂牛奶中，混匀冻干制备即得纯化的工作种子批菌种。

3.根据权利要求1所述的A群脑膜炎球菌的培养方法，其特征在于，所述纯化种子的开启过程如下：

将工作种子批菌种溶解到无菌水中，将其接种在10%羊血琼脂培养基上，放于35～37℃的环境下培养16～20小时后，挑选出健壮且无杂菌污染的菌种即可。

4.根据权利要求3所述的A群脑膜炎球菌的培养方法，其特征在于，所述步骤（2）的具体培育过程如下：

将开启后的纯化种子接种到半综合液体培养基中进行活化培养；活化培养的条件为温度35～37℃、pH7.0～7.2、搅拌速度140～150r/min，培养时间为6～8h；最后将活化后的纯化种子经过三代扩增培养，即可制备数量适宜的生产用种子。

5.根据权利要求4所述的A群脑膜炎球菌的培养方法，其特征在于，所述三代扩增培养的条件为：扩增培养用培养基为半综合液体培养基中；培育条件为温度35～37℃、pH7.0～7.2、搅拌速度140～150r/min。

6.根据权利要求1所述的A群脑膜炎球菌的培养方法，其特征在于，所述半综合液体培养基的组成配比如下：

牛肉浸出液1L，蛋白胨10g，氯化钠5g，无菌脱纤维马血、羊血或兔血100ml，葡萄糖3g，盐酸酪蛋白水解物2g，pH7.0～7.2。