[发明专利]白芨多糖水凝胶、培养基质及其应用与诱导脐带间充质干细胞向角膜上皮细胞分化的方法

权利要求书

1.白芨多糖水凝胶的制备方法，其特征在于，由白芨多糖经硫酸化后以ε-聚赖氨酸交联制得白芨多糖水凝胶；

所述白芨多糖的分子量为30000D～50000D；

所述硫酸化为：将白芨多糖溶于无水N,N-二甲基甲酰胺，室温搅拌30min后，加入硫酸化试剂，置于60℃水浴搅拌反应3h；所述硫酸化试剂由体积比为1:6的氯磺酸与吡啶组成；

所述交联为，将硫酸化的白芨多糖溶液与ε-聚赖氨酸溶液混合后静置；

所述交联的温度为18℃～35℃，时间为20s～40s；

所述ε-聚赖氨酸溶液的溶剂为PBS缓冲液，其中，ε-聚赖氨酸的质量分数为3％；

所述硫酸化的白芨多糖溶液的溶剂为PBS缓冲液，其中，硫酸化白芨多糖的浓度为200μg/mL。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述白芨多糖的制备方法为：将白芨粉碎后经水提醇沉，所得沉淀以水重悬，以氯仿和丁醇的混合物抽提后，经30000D～50000D透析，干燥制得白芨多糖。

3.权利要求1～2任一项所述制备方法制得的白芨多糖水凝胶。

4.权利要求1～2任一项所述制备方法制得的白芨多糖水凝胶在细胞培养或诱导分化中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述诱导分化为诱导脐带间充质干细胞向角膜上皮细胞分化。

6.诱导脐带间充质干细胞向角膜上皮细胞分化的方法，其特征在于，以权利要求1～2任一项所述制备方法制得的白芨多糖水凝胶为支架，在培养液存在条件下，将脐带间充质干细胞与羊膜上皮细胞共培养；所述培养液包括基础培养基、表皮生长因子和胰岛素。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述表皮生长因子与胰岛素的质量比为(5～25)：(5000～25000)。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述脐带间充质干细胞与羊膜上皮细胞的个数比为(1～1.5):(4～6)。