[发明专利]鉴别检测正常浆细胞和克隆性浆细胞的试剂盒及其应用

说明书

本发明属于细胞表型确认过程中的专用试剂盒结构设计，具体涉及一种应用八色抗体组合识别克隆性浆细胞表型的试剂盒及其应用。

背景技术

浆细胞疾病是指克隆性浆细胞（clonalplasmacells，cPCs）过度增殖并产生大量单克隆免疫球蛋白的一组疾病，cPCs是浆细胞疾病的发病根源。免疫球蛋白固定电泳或游离轻链检测可以帮助确定是否存在克隆性浆细胞，但无法提示其比例；如果cPCs为非分泌型，即不合成免疫球蛋白，则无法诊断。传统的骨髓形态学方法可以识别形态异常浆细胞或幼稚浆细胞的比例，但不能确定其克隆性。某些疾病例，如意义未明的单克隆丙种球蛋白病、冒烟型骨髓瘤，或治疗后的多发性骨髓瘤（multiplemyeloma，MM），骨髓中浆细胞数量较低，且多数同时存在cPCs和正常浆细胞（normalplasmacells，nPCs），此时通过传统的形态学方法难以鉴别。

多参数流式细胞仪（multiparameterflowcytometry，MFC）具有高敏感、高特异性。利用MFC对膜抗原检测，可以判断是否存在nPCs和异常表型浆细胞（abnormalplasmacells，aPCs）并确定其比例；通过对胞浆内免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）cKappa和cLambda轻链检测，可进一步判断nPCs是否为多克隆、aPCs是否为单克隆，以判断是否存在cPCs及其比例；当nPCs和aPCs同时存在且aPCs数量较低时，更显示其优越性。因此MFC被越来越多地应用于浆细胞疾病的检查，不仅可以帮助诊断，还可以在治疗后检测微量cPCs，对治疗效果进行评价，以便及时调整治疗方案。

如何选择合适的抗体组合是利用MFC准确区分nPCs、aPCs和cPCs的关键。目前文献报道多采用3-4色抗体组合，除去设门抗体，每管试管中只能检测1-2种其它抗体，若想检测多个抗体以确定浆细胞是否异常，需重复应用设门抗体，大概需要3-5组抗体组合，总共需要9-20个抗体；这样导致费用过高、所需标本量增大、操作费时，且灵敏度不高。而且，4色抗体组合无法同时囊括设门抗体、胞膜抗体和针对胞浆Ig轻链的抗体，不能达到分群设门并进一步分析克隆性的要求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种鉴别检测正常浆细胞和克隆性浆细胞的试剂盒及其应用，其采用8色抗体组合、借助流式细胞仪一次检测、经逐级设门即可准确区分nPCs、aPCs和cPCs并提示表达比例，检测的敏感度高、成本低、适用范围广，具有广泛的应用前景与临床意义。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

一种鉴别检测正常浆细胞和克隆性浆细胞的试剂盒，与流式细胞仪配套使用，所述试剂盒配备针对下述物质的单克隆抗体组合：IgκLightChain/IgλLightChain、CD19、CD117、CD138、CD56、CD38和CD45，并依次按照下述顺序依次进行荧光素标记：FITC/PE、PE-Cy5、PE-Cy7、APC、APC-Cy7、V450和V500。

本发明还提供了一种试剂盒在制备鉴别检测正常浆细胞和克隆性浆细胞的产品中的应用，所述应用包括：将所述试剂盒中针对CD19、CD117、CD138、CD56、CD38和CD45的单克隆抗体加入至同一个装有骨髓标本的试管中；经溶红细胞、破膜处理后，加入试剂盒中针对IgκLightChain/IgλLightChain的单克隆抗体，制成待测试样；将待测试样经流式细胞仪检测，设门分析如下：

①建立FSC/SSC密度图，将有核细胞区域划为R1；对R1细胞显示CD38/CD138散点图，将CD38⁺CD138⁺细胞划为R2；建立FSC/SSC散点图只显示R2门内细胞，将均一分布的细胞划为R3；

②将R3门内细胞分别建立CD19/CD56、CD19/CD45和CD19/CD117二维散点图，进一步对二维散点图内集中分布的细胞设门，标记为R4和/或R5；

③对应CD19/CD56、CD19/CD45和CD19/CD117中R4和/或R5门内细胞分别依次建立CD45/CD117、CD56/CD117和CD45/CD56的二维散点图；

④对应CD19/CD56、CD19/CD45和CD19/CD117中R4和/或R5门内细胞分别依次建立IgκLightChain/IgλLightChain二维点图，分析IgκLightChain和IgλLightChain的表达及其比值。