[发明专利]番茄黄化曲叶病抗病基因ty‑5的分子标记引物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及分子标记技术领域，具体涉及一种番茄黄化曲叶病抗病基因ty-5的分子标记引物及其应用。

背景技术

番茄(Solanum lycopersicum)是世界上重要的蔬菜作物，在促进农业经济发展、农民增收方面发挥着巨大的作用。种植过程中易受到多种病害的影响，导致产量下降，选育抗病品种十分重要。

番茄黄化曲叶病(Tomato yellow leaf curl disease TYLCD)是番茄的重要病害，该病害是由双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)的番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus TYLCV)引起，主要通过烟粉虱(Bemisia tabaci)传播。该病害最早报道于以色列，随着国际贸易往来的深入，TYLCV逐渐向全球范围扩展，20世纪90年代，该病害传入我国，目前已经遍布我国所有的番茄主产区，对番茄生产造成严重危害，造成巨大的经济损失。

TYLCV危害番茄后，通过农业防治、化学防治不仅效果差，甚至还会对生态环境造成破坏，选育和种植抗病品种是最经济、有效、环保的防治方法。由于TYLCV自身的变异，使得只含有Ty-1和Ty-2的番茄材料在一些区域丧失了抗性，而目前国内市场的番茄品种中均不含有ty-5基因，为了加快ty-5基因分子标记辅助育种(marker-assisted selection，MAS)的进程，开发与ty-5紧密连锁的标记，选育含有ty-5基因的材料具有重要的意义。

目前在ty-5连锁标记研究方面，只确定1个CAPS标记SlNAC1连锁，连锁距离尚不明确；(参见Hutton SF，Scott JW，Schuster DJ.Recessive Resistance to Tomato yellow leaf curl virus from the Tomato Cultivar Tyking Is Located in the Same Region as Ty-5on Chromosome 4.Hortscience，2012，47(3)：324-327)，并且该标记类型在进行检测时，需要对PCR产物进行酶切，实验成本高，操作繁琐。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种番茄黄化曲叶病抗病基因ty-5的分子标记引物，用于筛选与TYLCV抗性基因ty-5紧密连锁的分子标记。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

番茄黄化曲叶病抗病基因ty-5的分子标记引物，该分子标记引物包括

上游引物从5’端到3’端为：TAACAAAGCCCTCAAAGC；

下游引物5’端到3’端为：GTCTCCGAAACGTAATCC。

本发明另一个目的在于提供了一种番茄黄化曲叶病抗病基因ty-5的分子标记，解决常规育种中，抗性鉴定工作量大、周期长、成本高的问题；

番茄黄化曲叶病抗病基因ty-5的分子标记为InDel标记类型，是利用上述茄黄化曲叶病抗病基因ty-5的分子标记引物，经过PCR扩增得到的与ty-5紧密连锁的共显性DNA分子标记，该分子标记的核苷酸序列为SEQ ID No.3或SEQ ID No.4所示。

本发明的第三个目的在于提供一种番茄黄化曲叶病抗病基因ty-5的分子标记分子标记方法，克服ty-5标记需要酶切的缺陷，应用分子生物学方法，以含有ty-5基因番茄自交系AVTO1227为材料，筛选与TYLCV抗性基因ty-5紧密连锁的分子标记。

番茄黄化曲叶病抗病基因ty-5的分子标记方法，包括以下步骤：

1)提取番茄基因组DNA；

2)以上述番茄基因组DNA为模板与上述番茄黄化曲叶病抗病基因ty-5的分子标记引物进行PCR扩增，对PCR反应的产物进行分离、鉴定、显色后，检测判断番茄黄化曲叶病抗病基因ty-5。