[发明专利]一种鉴别生长性能优异的晋南牛的IGF2基因分子标记及其应用

权利要求书

1.晋南牛的IGF2基因分子标记SNP在鉴别生长性能优异中的应用，所述生长性能为体重、体斜长和胸围，所述分子标记SNP为晋南牛的IGF2基因上序列为CACCAGCCACGTC相应的位点，下划线处的碱基为C或T，此处碱基为C的晋南牛的生长性能显著高于此处碱基为T的晋南牛。

2.检测权利要求1所述分子标记SNP的引物对，其特征在于：核苷酸序列如下：

正向引物F：5’-TGGCAGCGACTGCTACTATTG-3’，

反向引物R：5’-GAGCACTCCAAAGGCAGCTTT-3’，

SNP分型延伸引物：5’-AGTCGAGAGCCTGGGGCACCAG-3’。

3.一种用于鉴别生长性能优异的晋南牛的试剂盒，其特征在于：包括权利要求2所述的引物对。

4.根据权利要求3所述的一种用于检测母猪胚胎存活的试剂盒，其特征在于：还包括PremixTaqTM、ExoI、FastAP、ExoIbuffer和SnapshotMix中一种或几种的混合物，所述PremixTaqTM由dNTPs、DNA聚合酶、Mg2+、PCR缓冲液组成。

5.一种利用SNP标记鉴定生长性能高的晋南牛的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)提取待检测晋南牛的基因组DNA；

(2)以第一步获得的基因组DNA为模板，利用权利要求2所述的引物F和R进行PCR扩增，获得晋南牛IGF2基因上203bp的目的片段；PCR反应体系为25μL，其中100ng/μL基因组DNA模板1μL，10pmol/μL引物F和R各1μL，12.5μLPremixTaqTM，9.5μLddH2O，PCR反应条件为：95℃10min；94℃30sec，60℃30sec，72℃30sec，35个循环；72℃10min；4℃forever；

(3)利用SnaPshot技术检测PCR产物，首先对PCR产物纯化：取PCR产物用ExoI和FastAP纯化，主要是用ExoI去除反应产物中的剩余引物，用FastAP去除反应中剩余的DNTP，反应体系为PCR产物3ul，ExoI0.2ul，FastAP0.8ul，ExoIbuffer0.7ul，补水至7ul，反应条件为37℃15min，80℃15min；然后进行延伸反应：体系为已纯化PCR产物2ul，SnapshotMix试剂1ul，延伸引物混合2ul，补水至6ul，条件为96℃1min；96℃10sec，52℃5sec，60℃30sec，30个循环；取1ul延伸产物，加10ul上样loading，95℃变性3min，立即冰水浴，上测序仪，如果扩增产物序列中71bp处为C，则待测晋南牛属于生长性能高的优势个体。

6.下述任一应用：

(1)权利要求1所述的分子标记SNP在鉴定生长性能高的晋南牛优势品种中的应用；

(2)权利要求2所述的引物对在鉴定生长性能高的晋南牛优势品种中的应用；

(3)权利要求3或权利要求4所述的试剂盒在鉴定生长性能高的晋南牛优势品种中的应用；

(4)权利要求5所述的方法在鉴定生长性能高的晋南牛优势品种中的应用。