[发明专利]一种血红蛋白D的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验技术领域，具体涉及一种血红蛋白D的检测方法。

背景技术

血红蛋白病是由于血红蛋白的质和量发生异常而引起的一种遗传性贫血综合症，现代医学称其为分子病。这种病在我国十分常见，目前常见的血红蛋白病有镰状细胞贫血、高铁血红蛋白症、氧亲和力异常血红蛋白症、HbE和HbC等。Hb Debrousse(血红蛋白D变异体)是近年来出现的一种罕见的血红蛋白病。Philippe Lacan等在美国血液学杂志发表了一篇题目为《Hemoglobin Debrousse(β96[FG3]Leu-Pro)：A NewUnstable Hemoglobin With Twofold Increased Oxygen Affinity》的论文，该论文公开了Hb Debrousse是一种外显子基因突变(hg19：chr115,247,832)所致的血红蛋白病，造成在β链96号密码子发生基因序列突变CD96 CTG＞CCG(Hb Debrousse(beta 96(FG3)Leu＞Pro)。

Hb Debrousse是一种不稳定血红蛋白与高亲氧性物质结合而产生的变异体，是在β链96号密码子发生基因序列突变CD96 CTG＞CCG(beta 96(FG3)Leu＞Pro)的血红蛋白病。血红蛋白病重症患者在胎儿期就可能死亡，有的终生靠输血维持生命；病症轻者，面色苍白，全身乏力，随时危及生命。因此，找出检测和鉴别血红蛋白病的可靠方法具有重要的意义。

目前，检测血红蛋白变异体的方法有很多，如电泳分析法、反相高效液相色谱法和质谱分析法。电泳法分离异常血红蛋白主要是依赖其不同的带电状态进行分离；而反相高效液相色谱法分离异常血红蛋白主要是基于血红蛋白链的疏水特性。但是，对于罕见的Hb Debrousse，目前仅有基因测序方法可以检测出Hb Debrousse。由于基因测序法存在操作繁琐、检测成本高和对操作人员要求高的缺陷，对于Hb Debrousse的临床检测存在诸多不便。

经研究发现，Hb Debrousse会干扰糖化血红蛋白的检测，影响糖尿病患者的血糖监测，不利于糖尿病患者的疾病监控和治疗。因此，寻找出一种操作简单、便捷，检测结果准确的Hb Debrousse检测和鉴别方法是当前亟需解决的难题。

发明内容

为了弥补现有技术中血红蛋白D检测方法操作繁琐和检测成本高的缺陷，本发明的目的在于提供操作简单、检测结果准确的血红蛋白D的检测方法。

本发明提供的血红蛋白D的检测方法，包括以下步骤：

S1标本溶液处理：取体积比为9∶1的血标本和乙二胺四乙酸溶液完全混匀，得混合血标本，接着取混合血标本加入去离子水稀释100倍；

S2样品测定：

高效液相色谱仪的色谱条件：采用双泵系统，所用流动相A为有机溶剂，流速为0.15-2.0mL/min，流动相B为纯化水，流速为0.15-2.0mL/min，使用硼酸基亲和色谱柱，柱流速为0.15-1.0mL/min，温度为25-30℃，进样量为20μL，设定色谱检测波长为413-415nm，分别将标本溶液进行样品测定。

进一步地，所述步骤S2中样品测定还包括内标FASC质控液、Control I质控液和Control II质控液的测定步骤。

进一步地，所述步骤S2中流动相A的有机溶剂由0.0006-0.0009％BIS-TRIS盐酸盐、0.025-0.03％氰化钾和96.91-97.44％纯化水组成，有机溶剂进一步优选为0.0008％BIS-TRIS盐酸盐、0.028％氰化钾和97.12％纯化水组成。

进一步地，所述步骤S2中有机溶剂的流速为1.5mL/min。

进一步地，所述步骤S2中纯化水的流速为1.5mL/min。

进一步地，所述步骤S2柱流速为0.8mL/min。

进一步地，所述步骤S2中温度为25℃。

进一步地，所述步骤S2色谱检测波长为413nm。

本发明中的BIS-TRIS盐酸盐的英文名称为Bis Tri HCL，其CAS号为124763-51-5。

与现有技术相比，本发明的血红蛋白D检测方法具有以下优点：本发明提供的血红蛋白D的检测方法为患有罕见的血红蛋白D的患者提供了新的检测方法，而且本发明的检测方法还具有操作简单、结果准确和检测成本低的优点，更有利于临床应用。

附图说明

图1为高效液相色谱仪法检测Hb Debrousse的色谱图；