[发明专利]一种抗乙型肝炎病毒的肽核酸及其用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术与材料科学领域，涉及一种抗乙型肝炎病毒的肽核酸及其用途。

背景技术

乙型肝炎病毒(HBV)是一种具有嗜肝性的、不引起细胞病变的DNA病毒。乙肝病毒感染一直以来都是世界范围内重大的医疗健康问题。当今全球仍有约3.5～4亿人受到慢性乙肝的困扰。乙型肝炎病毒(HBV)的持续感染将使得病人罹患慢性活跃性肝炎、肝硬化和肝细胞癌(HCC)的概率大幅上升。全球超过半数的肝脏癌症都与乙肝病毒感染有关。

当今临床上应用于乙肝治疗的主要是干扰素和核酸类似物类药物。然而，由于干扰素易产生毒副作用，而例如拉米夫定(3TC)等核酸类似物在临床长期应用中易引起耐药性。

近年来，研发多种新型抗乙型肝炎药物或活性物质的研究相继被报道，大多采用选取新型药物靶标或降低药物毒副作用等方法，以提升药物的性能。然而，仍然没有能够完美治疗乙肝病毒(HBV)感染的药物问世。设计、开发和研究新型抗乙肝药物仍然十分重要而急迫。

肽核酸(PNA)是一种人工合成的多聚物，通常被以配对结合靶标的方法应用于疾病治疗或用于临床分子诊断。肽核酸(PNA)是具有人工合成骨架的核酸类似物。然而，由于其骨架呈电中性且柔韧性极强，肽核酸表现出与DNA或RNA分子很高的结合力和特异性，且极难被核酸酶和蛋白酶识别和降解。因此具有较长的半衰期。另外，肽核酸(PNA)分子往往毒性很低，有较大的应用潜力。材料学上，为了使一种材料分子能够实现更多功能，常常将肽核酸(PNA)与一些其他功能基团进行螯合。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗乙型肝炎病毒的肽核酸。本发明的另一目的在于提供一种抗乙型肝炎病毒的肽核酸复合体。本发明的再一目的在于提供上述肽核酸、肽核酸复合体的用途。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种抗乙型肝炎病毒的肽核酸，其核酸序列为5’-GCAGAGGTGAA-3’(SEQ ID NO.1)。

一种抗乙型肝炎病毒的肽核酸复合体，为在上述肽核酸上螯合了细胞穿膜肽。所述的细胞穿膜肽优选为Tat(GRKKRRQRRRPPGC，SEQ ID NO.2)，细胞穿膜肽为Tat时，该肽核酸复合体的氨基酸与核酸序列为：NH₂-GRKKRRQRRRPPGC-MPA-GCAGAGGTGAA-3’，MPA为3-马来酰亚胺基丙酸基团。

上述肽核酸或肽核酸复合体在制备抗乙型肝炎病毒的药物中的应用。

上述肽核酸或肽核酸复合体在制备治疗和/或预防乙型肝炎的药物中的应用。

本发明具有如下优点和有益效果：

(1)本发明的肽核酸和肽核酸复合体含有11个碱基，生产方法简便，无细胞毒性，水溶性较好。

(2)本发明的肽核酸和肽核酸复合体抗病毒活性高，能自主穿透细胞膜进入被HBV感染的细胞，对HBV的复制有明显的抑制作用，当其浓度在1μM左右时对HBV的抑制率就可以达到50％，其具有抑制乙肝病毒感染的功能，抑制效果显著，对肝脏细胞无毒副作用。与现有的抗病毒药物相比，本发明的肽核酸复合体具有更加直接而且有效的作用。

附图说明

图1是Tat-PNA-DR的设计与合成流程图。

图2是PNA-DR的质谱鉴定图。

图3是HPLC分离纯化Tat-PNA-DR的结果图。

图4是HPLC分离纯化后的Tat-PNA-DR质谱分析图。

图5是不同浓度Tat-PNA-DR对HepG2.2.15细胞毒性检测柱状结果图。

图6是不同浓度Tat-PNA-DR对HepG2.2.15细胞系上清中HBV e抗原浓度影响的结果图，横坐标为Tat-PNA-DR的浓度(μM)，纵坐标为相应浓度的Tat-PNA-DR处理后病毒蛋白的量，以不添加Tat-PNA-DR(即Tat-PNA-DR浓度为0μM)的实验组的蛋白量作为100％。

图7是不同浓度Tat-PNA-DR对HepG2.2.15细胞系上清中HBV s抗原浓度影响的结果图，横坐标为Tat-PNA-DR的浓度(μM)，纵坐标为相应浓度的Tat-PNA-DR处理后病毒蛋白的量，以不添加Tat-PNA-DR(即Tat-PNA-DR浓度为0μM)的实验组的蛋白量作为100％。

图8是Tat-PNA-DR在HBV小鼠急性感染模型中对HBV e抗原抑制效果的结果图，横坐标为实验动物不同处理方式的分组，纵坐标为小鼠血清中e抗原的浓度。