[发明专利]视网膜色素上皮细胞上皮－间充质转换模型及其应用有效
| 申请号： | 201510519705.9 | 申请日： | 2015-08-21 |
| 公开（公告）号： | CN105112354B | 公开（公告）日： | 2018-07-24 |
| 发明（设计）人： | 吕立夏;徐国彤 | 申请（专利权）人： | 同济大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/10 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 赵志远 |
| 地址： | 200092 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 视网膜 色素 上皮细胞 上皮 间充质 转换 模型 及其 应用 | ||
1.一种视网膜色素上皮细胞上皮－间充质转换模型的应用，其特征在于，该模型用于研究视网膜色素上皮细胞发生上皮－间充质转换的分子机制及寻找上皮－间充质转换的干预靶向；
所述视网膜色素上皮细胞上皮－间充质转换模型的建立方法为：将ARPE-19细胞用胰酶消化后，再转入无血清含N2和非必需氨基酸的DMEM-F12培养基中，并在陪替氏培养皿中培养；
所述应用为：先在细胞皿中将pSTAT3-TA-luc报告基因的质粒用lipofectaminer 2000转染到ARPE-19中，48小时后将细胞转入无血清含N2和非必需氨基酸的DMEM-F12培养基中在细菌皿中培养，分别于12h、24h、36h、48h、72h后收集细胞样本，蛋白裂解后常规BCA蛋白定量，并用Luciferase检测信号传导和转录激活因子3的表达。
2.根据权利要求1所述的一种视网膜色素上皮细胞上皮－间充质转换模型的应用，其特征在于，所述的N2在DMEM-F12培养基中含量为1wt.％，所述的非必需氨基酸在DMEM-F12培养基中含量为1wt.％。
3.根据权利要求1所述的一种视网膜色素上皮细胞上皮－间充质转换模型的应用，其特征在于，所述的非必需氨基酸为市售的含有12种非必需氨基酸的标准添加剂。
4.根据权利要求1所述的一种视网膜色素上皮细胞上皮－间充质转换模型的应用，其特征在于，在培养皿中，所述的ARPE-19细胞的密度为0.5×107～1×107cells/培养皿。
5.根据权利要求1所述的一种视网膜色素上皮细胞上皮－间充质转换模型的应用，其特征在于，培养设定时间后收集细胞样本或溶于trizol中，通过显微照相、基因芯片、荧光定量PCR、Western blot或ELISA实验方法证实ARPE-19确实经历了上皮－间充质转换。
6.根据权利要求1所述的一种视网膜色素上皮细胞上皮－间充质转换模型的应用，其特征在于，该模型用于研究mir-24对ARPE-19发生上皮－间充质转换时的抑制作用。
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