[发明专利]无血清干细胞培养基及其应用

说明书

技术领域

本发明属于细胞培养基技术领域，具体涉及一种无血清干细胞培养基及其应用。

背景技术

干细胞在单纯的基础培养基中不能存活，在细胞培养中必须提供某些痕量营养物质及生长因子才能使细胞得以生长并维持生长状态。因此采用的基础培养基常常要添加血清，如马血清或胎牛血清；因为血清是由很多大小不同生物分子组成的极为复杂的混合物，它能提供细胞在体外培养时所需要的生长因子、激素、结合蛋白，并提供保护作用；而且本身血清中还富含有丝分裂因子，也利于细胞系和原代培养。但血清培养基存在一定的弊端，无法规避动物血清中的异源体，如果使用动物血清培养基培育出来的细胞，会存在人体异源体排斥和冲突。

尤其是在干细胞培养的过程中，血清中大量成分复杂的蛋白质，给细胞培养的标准化带来困难，其中复杂的蛋白和多重的细胞因子，会导致本身就容易分化的干细胞生出多种完全不同的细胞表型，而产生多种完全不同的细胞分化趋势，也给细胞培养表达产品分离纯化和结果的重复性带来很大的困难。

发明内容

本发明实施的目的在于克服血清培养基的缺陷，提供一种无血清干细胞培养基及其应用。

为了实现上述发明目的，本发明实施例的技术方案如下：

一种无血清干细胞培养基，包括基础培养基和添加在该基础培养基中的补充因子，所述补充因子包括亚硒酸钠、转铁蛋白、牛血清白蛋白、胰岛素、纤粘连蛋白和氢化可的松。

本发明还提出将上述无血清培养基进行干细胞培养方面的应用。

采用本发明的上述无血清干细胞培养基，针对干细胞自身容易生出多种完全不同的细胞表型和多种完全不同的细胞分化趋势的情形，采用上述各功能成分稳定和保持其分化水平，并且将其中的生长因子尽量控制保持在单一的水平；并且可以避免现有技术血清蛋白培养基存在的血清批次间的质量差异，提高细胞培养和试验结果的重复性；并避免血清所带来的外源性污染及血清组分的细胞毒性作用。并且其自身成分相对明确、质量一致且蛋白含量低，有利于提高细胞产品生产的稳定性并使细胞产品易于纯化。同时，在上述几种特定搭配维持干细胞增殖和性状程度后，可通过延长细胞的GI期或迫使细胞处于G0期而较长时间的维持细胞高密度培养，能更好地保持其干细胞特性。

附图说明

下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，附图中：

图1为本发明采用血清培养基培养干细胞至第4天时显微镜观察结果；

图2为本发明无血清培养基培养干细胞至第4天时显微镜观察结果；

图3为本发明采用血清培养基培养干细胞至第14天时显微镜观察结果；

图4为本发明无血清培养基培养干细胞至第14天时显微镜观察结果。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明实例提出一种无血清干细胞培养基，包括基础培养基，和添加在基础培养基中的补充因子，补充因子包括亚硒酸钠、转铁蛋白、牛血清白蛋白、胰岛素、纤粘连蛋白和氢化可的松。

本发明的无血清培养基针对干细胞培养中自身容易生出多种完全不同的细胞表型和多种完全不同的细胞分化趋势的情形，采用上述各功能成分稳定和保持其分化水平，并且将其中的生长因子尽量控制保持在单一的水平，并且可以避免现有技术血清蛋白培养基存在的血清批次间的质量差异，提高细胞培养和试验结果的重复性。

通常在干细胞的血清培养中，血清中具有较多天然成分，自身可以中和细胞毒素保护细胞，而无血清培养基首先需要解除毒素物质对干细胞的伤害；干细胞培养的过程中，过氧化氢是细胞生长和克隆的主要毒性物质，可由培养基中的酪氨酸、色氨酸、核黄素、抗坏血酸盐等产生，引起细胞膜上的饱和脂肪酸、细胞蛋白质氧化和DNA损伤而导致细胞死亡。本发明上述亚硒酸钠，其中含有的微量元素硒参与谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化物歧化酶的作用过程，可以促进氢过氧化物代谢，消除氧化物酶和氧自由基对细胞的伤害。

另一方面，转铁蛋白的添加之后，其与哺乳动物细胞上存在特定的转铁蛋白受体结合，形成的受体与转铁蛋白复合物是细胞获取必需的微量元素铁的主要来源，此外，转铁蛋白还具有生长因子的性质并能与其他微量元素如钒等结合。