[发明专利]一种利用啤酒废液生产酵母发酵态铜饲料添加剂的方法

说明书

一种利用啤酒废液生产酵母发酵态铜饲料添加剂的方法，其步骤包括培养基制备以及微生物培养、制备基础液体培养基与铜梯度培养基、微生物梯度培养、制备种子培养基、制备发酵种子、制备发酵液、微生物发酵、制作酵母发酵态铜饲料添加剂与包装。本发明提供了一种利用啤酒生产过程中糖化废水和发酵废水生产酵母发酵态铜饲料添加剂的处理方法，方法简单，容易操作，效果理想，既提高了资源利用效率，降低了生产成本，又可以对啤酒生产中的废水进行生物处理，减少了环境污染，并且，所制备的酵母发酵态铜饲料添加剂具有较高的生物有效性。

技术领域

本发明属于饲料添加剂及生物技术领域，尤其是一种利用啤酒废液生产酵母发酵态铜饲料添加剂的方法。

背景技术

铜是动物体必需的微量矿物元素之一，其在动物体内的含量约2~3mg/kg。铜主要作为金属酶组成部分直接参与体内代谢。此外，铜还参与铜的吸收以及骨骼的形成与发育。缺铜会引起动物骨骼发育受阻、贫血、皮毛发育不良及神经障碍等。动物缺铜可导致采食量下降、生长减慢、饲料利用率降低、骨骼异常、共济失调及繁殖功能异常等。日粮添加一定量铜是满足动物体铜需要的重要措施。目前，铜的主要添加形式为含结晶水的硫酸铜，该铜化合物吸收率低，毒性大，环境污染严重。研发毒性低、利用率高的有机态铜制剂对改善铜在动物饲料中的添加利用具有重要意义。

我国是啤酒生产消费大国，在其生产过程中会产生20-30倍的废水，其中糖化废水和发酵废水中有机养分含量丰富。研究表明，糖化和发酵后排放的废水COD浓度在2000~4000mg/L，并且以可溶态的糖类、氨基酸、醇类、维生素等为主。因此，通过对其营养成分调控后，能够作为微生物的营养基质来生产一系列微生物发酵类产品。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用啤酒废液生产酵母发酵态铜饲料添加剂的方法，将啤酒生产过程中的废液（糖化废液和发酵废液）经过适当理化性质调控后作为发酵液，以酵母菌作为发酵菌种，对无机铜盐进行发酵处理，研制酵母发酵态的铜饲料添加剂，从而达到提高铜的生物利用率、降低添加量、减少环境污染的目的。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种利用啤酒废液生产酵母发酵态铜饲料添加剂的方法，所用的发酵菌种为啤酒酵母和产朊假丝酵母，所用的铜为可溶解在稀酸溶液中的无机铜化合物，具体制备步骤如下：

（1）培养基制备以及微生物培养

取葡萄糖20g、蛋白胨20g、酵母浸膏10g、琼脂20g，用蒸馏水溶解、定容至1000mL，用高压锅在121℃灭菌20min-30min，调pH至5.0~5.5，制得培养基，然后将啤酒酵母和产朊假丝酵母从冰箱取出复苏，培养于该培养基上24h，以获得复活的啤酒酵母和产朊假丝酵母；

（2）基础液体培养基与铜梯度培养基制备

基础液体培养基的制法为：依次向1000ml蒸馏水中加入葡萄糖20g、蛋白胨20g以及酵母浸膏10g，并搅拌混匀，调整pH至5.0~5.2，备用；

铜梯度培养基的制法为：在上述基础液体培养基中加入可溶解在稀酸溶液中的无机铜化合物，得到铜含量分别为50mg/L、100mg/L、150mg/L、300mg/L、500mg/L、800mg/L、1000mg/L的培养基，并与铜含量为0mg/L的基础液体培养基构成铜梯度培养基，备用；

（3）微生物梯度培养

将步骤（1）处理所获得的啤酒酵母和产朊假丝酵母分别依次培养于步骤（2）所制得铜梯度培养基中，培养时间为24h，培养温度为30.5℃；

（4）种子培养基的制备