[发明专利]产生抗体的非人哺乳动物

权利要求书

1.一种制备转基因小鼠的方法，包括通过位点特异性重组向小鼠种系中引入表达盒的步骤，其中所述表达盒包括编码人免疫球蛋白的重排的人VL区的核酸，其中所述VL区由人种系V和种系J区段编码，其中所述编码VL区的核酸靶向至小鼠Igκ或者λ轻链基因座以失活内源基因座，其中所述VL区基于其与至少两个人或鼠VH区配对的能力来选择，且其中所述转基因小鼠能够产生携带所述VL区和鼠或人轻链恒定区的抗体。

2.一种制备转基因小鼠的方法，包括通过位点特异性重组向小鼠种系中引入表达盒的步骤，其中所述表达盒包括编码人免疫球蛋白的重排的人VL区的核酸，其中所述VL区由人种系V和种系J区段编码，其中所述编码VL区的核酸靶向至Rosa基因座，其中所述VL区基于其与至少两个人或鼠VH区配对的能力来选择，且其中所述表达盒进一步编码鼠或人轻链恒定区。

3.如权利要求1或2的方法，其中所述VL区基于其与大部分人或鼠VH区配对的能力来选择。

4.如权利要求1或2的方法，其中所述编码重排的人VL区的核酸被导入小鼠受精卵或者胚胎干细胞的前核中。

5.如权利要求1或2的方法，其中所述转基因小鼠包含人VH基因座。

6.如权利要求1或2的方法，其中所述转基因小鼠进一步携带非重排的人VH基因座，其中所述人VL区能与在B细胞发育期间产生的至少0.1％的人VH区配对，且其中所述内源小鼠VH基因座被失活。

7.如权利要求1或2的方法，其中抗体特异性的不同通过重链中的重排和超突变保留。

8.分离自转基因小鼠的细胞，所述转基因小鼠包含引入其种系中的编码重排VL区的核酸，其中所述VL区由人种系V和种系J区段编码，其中编码所述VL区的核酸靶向至小鼠Igκ或者λ轻链基因座以失活内源基因座，其中所述VL区基于其与至少两个人或鼠VH区配对的能力来选择，且其中所述转基因小鼠能够产生携带所述VL区和鼠或人轻链恒定区的抗体。

9.分离自转基因小鼠的细胞，所述转基因小鼠包含引入其种系中的编码重排VL区的核酸，其中所述VL区由人种系V和种系J区段编码，其中编码所述VL区的核酸靶向至Rosa基因座，其中所述VL区基于其与至少两个人或鼠VH区配对的能力来选择，且其中所述核酸进一步编码鼠或人轻链恒定区。

10.如权利要求8或9的细胞，其中所述VL区基于其与大部分人或鼠VH区配对的能力来选择。

11.如权利要求8或9的细胞，其中所述转基因小鼠包含人VH基因座。

12.如权利要求8或9的细胞，其中所述转基因小鼠进一步携带非重排的人VH基因座，其中所述人VL区能与在B细胞发育期间产生的至少0.1％的人VH区配对，且其中所述内源小鼠VH基因座被失活。

13.如权利要求8或9的细胞，其中抗体特异性的不同通过重链中的重排和超突变保留。

14.从用特定抗原免疫后的权利要求11或12的转基因小鼠获得的B细胞用作VH区来源的用途，其中所述VH区通过构建cDNA文库或者通过使用人VH区的引物进行PCR扩增而可以被获得。

15.如权利要求14的用途，其中所述VH区通过构建cDNA文库或者通过使用人VH区的引物进行PCR扩增而获得。