[发明专利]一种富含甾醇的热带假丝酵母的培养方法

说明书

技术领域

本发明属于发酵工程技术领域，具体涉及一种富含甾醇的热带假丝酵母的培养方法。

背景技术

甾醇是甾族化合物中的一种，分子的基本骨架(称为环戊烷多氢菲核)有三个六元环和一个五元环组成。C-3位上连有一个羟基，C-17位连有由8～10个碳原子构成的侧链，多数甾醇C-5位为双键。由于C-17位上的侧链不同和C-3位上羟基结合的物质不同,甾醇的种类也不同。

甾醇是生物体内天然有机化合物,广泛存在于动物、植物、微生物的组织中。在动物组织中以胆甾醇(又称胆固醇)为主；在植物组织(主要是种子)中，主要是β-谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇；在微生物中主要是麦角甾醇。因此，胆甾醇被称为动物甾醇；β-谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇被称为植物甾醇；麦角甾醇被称为微生物甾醇。植物甾醇主要来源于植物油，其含量仅为0.04％～0.1％。由于甾醇是真核生物细胞膜的组成成分，因此，所有的真核生物均含有甾醇，但甾醇的种类及其含量有很大的差别，其中酵母菌属中酿酒酵母的甾醇较为丰富。酿酒酵母可以合成约20种甾醇，甾醇总含量最大为4.6％(细胞干重)，其中麦角甾醇占总甾醇的90％。

甾醇被誉为“生命的钥匙”，具有十分重要的生理功能。β-谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇具有降血清胆固醇、降血脂、抗肿瘤、降低心脏病发生率、防止前列腺疾病,以及抗癌、调节动物的生长、抗炎、抗病毒、延缓衰老等作用。β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇和麦角甾醇也是多种激素、维生素D及甾族化合物合成的前体。因此，甾醇广泛应用于食品、医药、化妆品等工业领域。

申请号为95114213.5的中国专利公开了一种富含麦角甾醇酵母的制造方法，培养基中以糖蜜为碳源，培养基组分还包含适量的尿素、硫酸铵、磷酸等来发酵培养酵母菌，所得的酵母细胞中麦角甾醇含量可达到1.4％～1.6％。申请号为201080055130.5的中国专利公开了一种通过酵母生产非酵母的甾醇的制造方法，所使用的酵母可以是酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、毕赤酵母(Pichiaspp)、克鲁维酵母(Klyuveromycesspp)，汉逊酵母(Hansenulaspp)、裂殖酵母(Schizosaccharomycesspec.)和解脂酵母(Yarrowialipolytica),所生产的甾醇为7-脱氢胆固醇、25-羟基-7-脱氢胆固醇和25-羟基麦角甾醇。以脂肪酸为碳源发酵培养富含甾醇的热带假丝酵母的方法在国内外文献中均未见报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种富含甾醇的热带假丝酵母培养方法，所收获的热带假丝酵母细胞富含甾醇，其甾醇含量可达到6.23％～7.12％，而且所产生的甾醇以谷甾醇和菜油甾醇为主。

本发明的原理：热带假丝酵母具有能以游离脂肪酸和油脂作为碳源进行生长繁殖的特性。制备以游离脂肪酸或脂肪为唯一碳源的培养基；培养基经过高温灭菌、冷却后，接种热带假丝酵母进行通气好氧发酵；发酵结束后，离心收集菌体，即获得富含甾醇的热带假丝酵母细胞。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案予以实施：

一种富含甾醇的热带假丝酵母的培养方法，包括以下步骤：

a、种子培养基的配制及灭菌：按配比在1L水中，加入20～30g葡萄糖、10～20g蛋白胨、5～10g酵母粉,按照所述配比，将各种成分称重后加入三角瓶中，室温下搅拌均匀，制得种子培养基；用8层纱布密封后放入高压灭菌锅中，于115℃～121℃灭菌15～20min，灭菌后把三角瓶冷却至室温；

b、种子液的制备：挑取热带假丝酵母的斜面保藏菌种2～3环，接种到步骤a中所述的种子培养基中，于30℃、180～200rpm摇床振荡培养48h，备用；

c、发酵培养基的配制及灭菌：于1L水中，加入40～50g游离脂肪酸或油脂(所述油脂为大豆油、花生油、菜籽油、棉籽油等)、1.0～2.0g酵母粉、0.1～0.2g硫酸镁、0.1～0.2g磷酸氢二钾、0.1～0.2g磷酸二氢钾；按照所述配比，将各种成分称重后加入机械搅拌式发酵罐中，室温下搅拌均匀，并用0.5M氢氧化钠溶液调节pH值6.8～7.0，制得发酵培养基；然后向发酵罐通入蒸汽开始灭菌，待罐温上升到115℃～121℃，保温30min，灭菌结束后，引入冷却水将发酵培养基温度降至25℃～30℃；