[发明专利]一种枯草芽孢杆菌和应用、含有该枯草芽孢杆菌的微生物杀菌剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉微生物技术，具体涉及一种枯草芽孢杆菌和应用、含有该枯草芽孢杆菌的微生物杀菌剂及其制备方法。

背景技术

微生物是生物杀菌剂的重要来源，从中发现并商品化的品种多达几十种。相比化学杀菌剂，微生物杀菌剂具备选择性高、安全性好、易降解、用量少、残留少、污染小等优点。据统计，目前国际上生物农药产品已超过100多种，但90％以上是微生物杀虫剂。Philip(2002)预测第二个重要的商业化的生物农药将是微生物杀菌剂。微生物杀菌剂主要有农用抗生素、细菌杀菌剂、真菌杀菌剂等类型。由于细菌的种类多、数量大、繁殖速度快，可以通过功能基因的修饰、改造、转移等基因工程手段构建新型的工程菌，且易于人工培养和控制。因此，细菌杀菌剂的研究和开发具有较大的前景。

近年来，以细菌防治植物病害取得了较大的进展。在国外用放射土壤杆菌k84菌系防治果树的根癌病是最成功的例子，并且已商品化。美国报道，用草生欧氏杆菌防治梨火疫病效果与链霉素相当。在我国细菌生物防治剂的研究方面也取得了一定的成果。开发成功的细菌杀菌剂有亚宝(枯草芽孢杆菌)、力宝(假单胞菌)、增产菌(蜡质芽孢杆菌)，地衣芽孢杆菌制剂和荧光假单胞制剂也已商品化。沈阳农业大学生物农药工程中心利用拮抗木霉(绿色木霉TR-8)和拮抗细菌(芽孢杆菌B67)混合发酵制成健根宝粉剂，成功用于防治蔬菜和甜瓜的苗期病害。其他报道的细菌杀菌剂还有：用来防治黄瓜及烟草炭疽病菌的地衣芽孢杆菌，防治甘蓝黑腐病的枯草芽孢杆菌，以及防治水稻纹枯病的假单孢菌等。

细菌作为一种重要的微生物资源，其抑菌活性值得深入研究。用于生防的细菌以芽孢杆菌为主，主要有枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、多粘芽孢杆菌(B.polymyxa)、蜡状芽孢杆菌(B.cereus)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、巨大芽孢杆菌(B.megaterium)和短小芽孢杆菌(B.pumilis)等。它们大量存在植物根际，定殖于植物根面，繁殖快，可产生嗜铁索和抗生素，在植物局部和空间微环境与目的菌竞争，对多种植物病原菌有抑制作用。由于芽孢杆菌具有抑制植物病害的能力，又是自然界中广泛存在的非致病细菌，对人畜无害，不污染环境，因而备受关注。

国内外学者先后分别报道了具有生物控制作用的各个不同株系的枯草芽孢杆菌的生物学特征、定殖条件、抗菌物质理化特性等相关研究及其在不同作物根部定殖情况、对腐霉、镰刀菌等引起的不同土传病害的防治效果、潜在的诱导植物产生抗病性及促进幼苗生长等方面的研究。已有研究表明，因芽孢杆菌能生产内生芽孢，具有极强的抗逆能力，相比其他类型的生防因子，更有利于菌剂的生产，剂型加工及在环境中存活，定殖与繁殖。

发明内容

为了使枯草芽孢杆菌在杀菌中的应用，本发明提供了一种枯草芽孢杆菌和应用、含有该枯草芽孢杆菌的微生物杀菌剂及其制备方法。

本发明的技术方案是：一种枯草芽孢杆菌，所述的枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HU2012，保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏单位地址是：中国湖北省武汉市武汉大学，保藏时间为2015年4月7日，保藏号为CCTCCNO:M2015206。

本发明还提供了一种上述枯草芽孢杆菌的微生物杀菌剂，其活性成分为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HU2012。

本发明进一步提供了如上述的枯草芽孢杆菌在制备抑制小麦赤霉病菌、水稻纹枯病菌或灰霉病菌药物中的应用。

本发明的进一步改进包括

上述的枯草芽孢杆菌，其培养基为PD培养基，其中含有马铃薯200g水煎液，葡萄糖12g，加水配制1000ml，并调节pH值7.0。

所述的微生物杀菌剂，包括枯草芽孢杆菌和无水CaCO₃；将3倍重量的CaCO₃和沸石粉混合物按重量比1∶1缓慢加入活菌体中，边加边搅拌，直至均匀；于真空干燥箱中50℃烘干30min至粉末状。

本发明还提供了上述微生物杀菌剂的使用方法，具体是兑水使用，微生物杀菌剂∶水按重量比例为1∶1000，此时菌剂溶液中活芽孢数为1×10⁶cfu/g。