[发明专利]一种伊蚊DNA条形码标准基因序列及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及物种鉴定领域，具体涉及一种伊蚊DNA条形码标准基因序列。

背景技术

西表伊蚊，Aedes(Verrallina)iriomotensis(TanakaandMizusawa，1973)，属双翅目(Diptera)、蚊科(Culicidae)、伊蚊属(Aedes)、奇阳蚊亚属(Verrallina)。伊蚊是蚊科中最大一属，近1000种，中国有100余种。伊蚊会传播很多疾病，对人类的健康带来了危害，黄热病与登革热就主要通过伊蚊传播。中国伊蚊中研究比较多的是埃及伊蚊和白纹伊蚊。但目前对西表伊蚊的研究比较少，是否可能携带病毒及传播疾病还知之甚少，有待进一步研究。

对蚊虫的鉴定和识别，是监测和控制蚊媒传染病的基础，也是疾病预防与控制的重要步骤。目前对蚊虫的鉴定主要依靠经验丰富的分类学家对蚊虫的形态特征，但对近缘种或形态残缺标本的鉴定十分困难。急需新的方法，以弥补传统形态学方法的缺陷。

DNA条形码技术(DNABarcoding)是通过对一个标准目的基因的DNA序列进行分析，从而快速、准确地进行物种鉴定的技术。近几年来，DNA条形码技术已被证明是一个行之有效的生物鉴定手段，不仅可对传统鉴定方法作强有力的补充，而且因为其更客观、准确，突破以往对经验的过度依赖，能帮助鉴定物种、发现新种和隐种、重建物种和高级阶元的演化关系等。

作为DNA条形码的标准目的基因，一方面必须足够保守，便于利用通用引物进行大范围的扩增；另一方面，要有足够的变异来区分不同的物种。因此，鉴定不同的物种类群需要选择有效的目的基因。目前，在系统发育研究中广泛应用的标志基因是核糖体12S和16S基因，但因其存在大量的插入和缺失现象，不宜用作条形码基因。线粒体基因组中存在的13个蛋白编码基因中仅细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(CytochromeOxidaseSubunitⅠ,COⅠ)、线粒体细胞色素b(Cytb)、ND4、ND5这4个基因满足基因插入和缺失现象较少、长度在900bp左右这两个条件，但ND4、ND5进化太快，不可能设计出通用引物，限制了它们作为全面DNA鉴定系统的目标基因。因此，人们最终选定COⅠ基因中的一个片段作为DNA条形码基因。迄今为止，已有诸多研究证明COⅠ基因在鸟类、鱼类、鳞翅目昆虫、蚊类、蚁类和弹尾目等类群的分类鉴定中行之有效。因此，可以采用基于COⅠ基因的DNA条形码技术对蚊类进行分子鉴定。该方法与传统的分类方法互为佐证，不仅可解决鉴定中标本残缺不全等问题，而且有利于实现蚊类的快速鉴定。目前，该方法在蚊类分子鉴定中的应用仅局限在少数蚊种，Genbank中也仅有少数蚊种的COⅠ基因序列，但至今尚无西表伊蚊的相关基因序列。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明公开了一种西表伊蚊DNA条形码标准基因序列及其检测和鉴定方法。

一种伊蚊DNA条形码标准基因序列，所述基因为西表伊蚊COⅠ基因，其如序列表SEQIDNO.1所示：

本发明的内容还包括所述的伊蚊DNA条形码标准基因序列在检测和鉴定西表伊蚊中的应用。

进一步地，所述应用包括西表伊蚊的分子鉴定方法，包括以下步骤：

1)从待测的组织中分离提取DNA；

2)以该DNA为模板，选择相应PCR引物,通过PCR扩增待测组织的COⅠ基因；

3)然后取适量步骤2)扩增产物用琼脂糖电泳分离，经染色后观察，如果能特异性扩增出,600bp左右的条带，则对其进行测序；

4)将测序结果与序列表SEQIDNO.1所示的伊蚊DNA条形码标准基因序列相比较，如二者同源性在98％以上，即可判断所述的待测组织即为西表伊蚊。

本发明提供的西表伊蚊DNA条形码标准基因序列有利于实现西表伊蚊的快速鉴定，缩短鉴定时间。本发明的鉴定方法填补了西表伊蚊分子鉴定领域的空白，相对传统形态学鉴定更高效便利，减少误差，保证结果具有可靠性。

为了更好地理解和实施，下面结合附图详细说明本发明。

附图说明

图1为西表伊文COⅠ基因PCR扩增产物电泳图谱。其中，1号-11号：西表伊蚊；M：MarkerDL100bp；12号：空白对照。

图2和图3为待检测组织PCR扩增产物电泳图谱。其中，图2：1号-6号：待检测组织，M：MarkerDL100bp；图3：1号：空白对照，2号-6号：待检测组织，M：MarkerDL100bp。

具体实施方式