[发明专利]一种磁性纳米材料及其制备方法和用途

权利要求书

1.Fe₃O₄@NH₂@SPDP磁性纳米材料在用于富集棕榈酰化修饰蛋白质和/或肽段的方法中的用途，所述的Fe₃O₄@NH₂@SPDP磁性纳米材料通过采用合成的纳米Fe₃O₄磁核作为材料磁性中心，将3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯SPDP包裹Fe₃O₄磁核，制得Fe₃O₄@NH₂@SPDP磁性纳米材料，其包括步骤：

(1)称取无水乙酸钠NaAc与三氯化铁FeCl₃·6H₂O于烧杯中，加入乙二醇，搅拌溶解；

(2)将蜡状固体1,6-己二胺加热溶解变为液体状，加入已经完全溶解了NaAc和FeCl₃·6H₂O的乙二醇溶液的反应烧杯中，溶解完全后，溶液变为红橙色；

(3)将溶解后的溶液倒入反应釜中；

(4)将反应釜放入烘箱中，180℃反应6h；

(5)反应结束后，取出冷却；

(6)分别用水和乙醇对反应结束后的材料进行洗涤，制得氨基磁珠Fe₃O₄@NH₂；

(7)取制得的氨基磁珠Fe₃O₄@NH₂，用乙醇和PBS-EDTA各洗三次后，用PBS-EDTA配成浓度为1mg/ml；

(8)用二甲基亚砜DMSO溶解SPDP粉末后，加入Fe₃O₄@NH₂溶液后的浓度为1mg/ml；

(9)在避光条件下室温反应过夜，所述SPDP嫁接到氨基磁珠纳米材料上，得Fe₃O₄@NH₂@SPDP纳米材料；

(10)将获得的Fe₃O₄@NH₂@SPDP用PBS-EDTA溶液洗涤后备用。

2.按权利要求1所述的磁性纳米材料在用于富集棕榈酰化修饰蛋白质和/或肽段的方法中的用途，其特征在于，所述的富集棕榈酰化修饰蛋白质和/或肽段的方法中，用合成的Fe₃O₄@NH₂@SPDP纳米材料作为富集材料对含有棕榈酰化修饰蛋白质和/或肽段的混合物进行选择性富集，得到修饰蛋白质和/或肽段信息。

3.按权利要求2所述的磁性纳米材料在用于富集棕榈酰化修饰蛋白质和/或肽段的方法中的用途，其特征在于，所述的选择性富集是从肽段层面和蛋白层面两个路线进行富集，将肽段层面得到的样品经过液相色谱-串级质谱联用分析后，得到修饰蛋白质和/或肽段的信息。

4.按权利要求1所述的磁性纳米材料在用于富集棕榈酰化修饰蛋白质和/或肽段的方法中的用途，其特征在于，所述的富集棕榈酰化修饰蛋白质和/或肽段的方法，其包括：

以合成的带有棕榈酸修饰的肽段GDFC#IQVGR作为标准修饰肽段，其中的#代表棕榈酰化修饰位点，用Fe₃O₄@NH₂@SPDP作为富集材料进行特异性富集，测试富集效果；

以标准合成肽段GDFC#IQVGR与马心肌红蛋白MYO酶解肽段的混合物作为模型测试Fe₃O₄@NH₂@SPDP的选择性富集GDFC#IQVGR的效果；

以GDFC#IQVGR为标准肽段，在逐渐降低肽段起始上样量的情况下用相同质量的Fe₃O₄@NH₂@SPDP富集GDFC#IQVGR，测试Fe₃O₄@NH₂@SPDP的富集灵敏度；

以GDFC#IQVGR为标准肽段，在加入相同比例的肽段混合物与Fe₃O₄@NH₂@SPDP孵育时，测试缩短反应时间的富集效果；

以GDFC#IQVGR为标准肽段，测试Fe₃O₄@NH₂@SPDP的富集容量；

用小鼠肝膜蛋白作为复杂生物样品，对得到的蛋白样品和酶解后肽段样品，用Fe₃O₄@NH₂@SPDP富集，测试Fe₃O₄@NH₂@SPDP用于实际样品分析的可行性。