[发明专利]一种利用ITS序列鉴定库拉索芦荟品种的方法

权利要求书

1.一种利用ITS序列鉴定库拉索芦荟品种的方法，其特征在于，包括以下步 骤：

(1)收集健康新鲜芦荟样品的成熟叶片，提取总DNA；或者从芦荟食品中提 取芦荟凝胶总DNA；

(2)以步骤(1)中提取的DNA为模板，使用SEQIDNO:2和3所示引物进 行PCR扩增反应，扩增ITS序列；

(3)PCR产物进行直接测序；

(4)利用MEGA4.1软件对测序结果进行序列比对和聚类分析，绘制系统发育 树，根据序列比对和聚类分析结果鉴定库拉索芦荟品种。

其中，所述的ITS序列来源于库拉索芦荟的rDNAITS序列，是位于18S和 26SrRNA之间的DNA序列，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，收集健康新鲜芦荟样品的成熟 叶片，进行切割处理后置于柔软且透气性较好的纸袋，并放在装有硅胶的干燥盒中 进行干燥；或者收集健康新鲜芦荟样品的成熟叶片，进行切割处理后放入一次性培 养皿中，用保鲜膜封好，-20℃冷冻至芦荟叶片冷冻完全，随后放入冻干机中冷冻干 燥24h，后放在装有硅胶的干燥盒中进行干燥。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的硅胶是粉末状的直径为 20～30A的白色硅胶与蓝色变色硅胶的混合物。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的PCR扩增反应的反应体 以25μL计为：

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的PCR扩增反应的反应条 件为：94℃预变性4min，94℃变性40s，52℃复性40s，72℃延伸2min，30个循环， 最后72℃延伸10min，4℃保存。

6.一种ITS序列在鉴定库拉索芦荟品种中的应用，所述的ITS序列来源于库 拉索芦荟的rDNAITS序列，是位于18S和26SrRNA之间的DNA序列，其核苷酸 序列如SEQIDNO:1所示。