[发明专利]戴尔福特菌LW26及其在降解氯苯中的应用

权利要求书

1.戴尔福特菌(Delftia tsuruhatensis)LW26，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2015年3月15日，保藏编号CCTCC No：M 2015113，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072。

2.一种权利要求1所述的戴尔福特菌LW26在微生物降解氯苯中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的应用是将戴尔福特菌LW26接种至含有氯苯的无机盐培养基中，于23～40℃，pH 4.0～10.0的条件下培养，实现对氯苯的降解；所述的无机盐培养基组成为：CaCl₂ 0.023g/L，MgSO₄ 0.2g/L，(NH₄)₂SO₄ 2.5g/L，KH₂PO₄1.0g/L，Na₂HPO₄ 4.5g/L，微量元素母液1mL/L，溶剂为水，pH 7.0～7.5；所述的微量元素母液组成为：FeSO₄·7H₂O 1.0g/L，CuSO₄·5H₂O 0.02g/L，H₃BO₃ 0.014g/L，MnSO₄·4H₂O0.10g/L，ZnSO₄·7H₂O 0.10g/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.02g/L，CoCl₂·6H₂O 0.02g/L，溶剂为水。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述氯苯在无机盐培养基中初始浓度为100～500mg/L；所述戴尔福特菌LW26以种子培养或发酵培养后的湿菌体经无机盐培养基稀释获得的OD₆₀₀＝0.1-0.5的菌悬液形式加入，菌悬液体积接种量为1-5％。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的菌悬液按如下步骤获得：

(1)斜面培养：将戴尔福特菌LW26接种于R₂A固体培养基，28～32℃培养48h，获得斜面菌体；所述R₂A固体培养基组成为：酵母粉0.50g/L，胰蛋白胨0.50g/L，干酪素0.50g/L，葡萄糖0.50g/L，可溶性淀粉0.50g/L，丙酮酸钠0.30g/L，KH₂PO₄ 0.45g/L，MgSO₄ 0.05g/L，琼脂15～18g/L，溶剂为水，pH 7.2；

(2)种子培养：从步骤(1)斜面上挑取一接种环菌落接种至种子培养基中，28～32℃培养24～36h，获得种子液；所述的种子培养基为R₂A液体培养基，除无琼脂外，其余组分与R₂A固体培养基相同；

(3)发酵培养：将步骤(2)获得的种子液以体积浓度5～10％的接种量接种至发酵培养基，于28～32℃，pH 6.0～8.0条件下培养24～36h，获得发酵液；所述发酵培养基组成为：酵母粉0.5g/L，CaCl₂ 0.023g/L，MgSO₄ 0.2g/L，(NH₄)₂SO₄ 2.5g/L，KH₂PO₄ 1.0g/L，Na₂HPO₄4.5g/L，微量元素母液1mL/L，溶剂为水，pH 7.0～7.5；

(4)菌悬液制备：将发酵液在6000rpm离心10min，弃上清液，用已灭菌的无机盐培养基清洗菌体，然后6000rpm离心10min，弃上清液，重复洗涤2次，将获得的湿菌体用无菌无机盐培养基悬浮，获得所述的菌悬液。