[发明专利]一种与鸡腹脂沉积相关的miRNA及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子标记领域，具体地说，涉及一种与鸡腹脂沉积相关的miRNA及其应用。

背景技术

近二十年来，肉鸡遗传改良在体增重、生长速度及饲料报酬等方面取得了较大的进展，但同时也伴随着脂肪的过度沉积，特别是腹脂沉积。现代商业肉鸡品种每公斤体重就包含150-200g的脂肪，这些脂肪中约80％并非生理需求，从而大大降低了饲料利用率。这些多余的脂肪在屠宰时只能当废弃物丢弃，不但会直接影响肉产品的加工，而且还造成了一定的资源浪费和环境污染。脂肪的过度沉积已成为肉鸡生产中所面临的一个严峻问题。因此，低腹脂沉积一直是肉鸡品系选育的重要目标之一。

miRNA(MicroRNAs)是一类非编码单链RNA分子，在细胞增殖、分化和凋亡、肿瘤形成等生理过程中发挥重要的调控作用。近年来的研究表明，miRNA是人类和动物脂肪细胞分化、脂肪沉积过程中所不可缺少的调节因子。如果可以获得与主选性状及其关键基因相关的miRNA作为分子标记，即可以实现目标性状的早期选择，加快遗传选择进展。

miRNA对动物生长发育的调控作用是通过调控其特定靶基因来实现，仅仅借助于生物信息软件来预测靶基因，无疑将会是大海捞针。而通过某一特定时期、特定组织中miRNA和mRNA同时深度测序分析，根据miRNA和mRNA呈负相关表达的原理，并结合靶基因软件预测的结果，会大大缩小对目标miRNA靶基因的筛选范围。通过miRNA-mRNA联合分析，为鉴定调控腹脂沉积这类复杂性状的miRNA提供了一个全新手段。

综上所述，在当前家禽饲养成本急剧飙升的情势下，利用分子标记辅助选择法对腹脂沉积这一复杂性状进行选择提高，可较大的提高饲料报酬，进而节省新品系选育的成本。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种与鸡腹脂沉积相关的miRNA及其应用。

为了实现本发明目的，本发明首先提供一种与鸡腹脂沉积相关的miRNA，所述miRNA的靶标基因是ACSL1。

进一步地，所述miRNA为gga-miR-19b-3p，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

本发明进一步提供了前述miRNA在调控前脂肪细胞增殖和分化中的应用，所述miRNA通过调控ACSL1基因的表达，调控前脂肪细胞的增殖和分化。

本发明还提供了前述miRNA作为分子标记在遗传标记辅助育种和改善鸡腹脂沉积中的应用。

进一步地，所述应用具体为通过检测鸡腹脂组织中所述miRNA的表达水平，判断鸡腹脂重/率的高低从而进行筛选。

本发明还提供了检测前述miRNA表达水平的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)提取待测鸡腹脂组织中含有小RNA的总RNA；

(2)通过poly(A)聚合酶在miRNA的3’末端加上多聚A，以互补的多聚T为3’引物，利用反转录酶进行miRNA反转录；

(3)采用miRNA特异正向引物TGTGCAAATCCATGCAAAAC

TGA及适用于加尾法的荧光定量PCR试剂盒进行gga-miR-19b-3p的扩增；扩增后利用2^-ΔΔC法计算获得gga-miR-19b-3p表达水平。

本发明还提供了一种检测鸡腹脂组织中gga-miR-19b-3p表达水平的荧光定量PCR试剂盒。

所述试剂盒包括：反转录试剂、目的miRNA的特异性上游引物、内参引物和荧光定量PCR反应液。

所述目的miRNA的特异性上游引物序列为TGTGCAAATCCATGCAAAACT

GA。

内参上游引物可以为：CGATACAGAGAAGATTAGCATGGCCCCTGCCCTGTCTC。

本发明的有益效果在于：

本发明提供的miRNA(gga-miR-19b-3p)与鸡腹脂沉积具有很好的相关性，通过有效性和分子生物学验证，gga-miR-19b-3p在高低腹脂组样本间差异表达10倍以上。本发明提供的miRNA可用于鸡腹脂重/率相关的辅助遗传育种中，可实现早期辅助选择。

本发明提供的检测gga-miR-19b-3p表达水平的荧光定量PCR试剂盒包含了从RNA提取到荧光定量实验所用的整套试剂，既方便使用、简化操作，又保证了结果的一致性。

附图说明

图1为ACSL1的3’UTR与gga-miR19b-3p的结合位点。