[发明专利]多项呼吸道病原体检测试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检测领域，涉及一种多项呼吸道病原体检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

现有的七项呼吸道病原体检测试剂盒（免疫荧光法）是荧光素标记的抗体与细胞上的病毒抗原结合，形成抗体抗原复合物，在荧光显微镜下观察呈现绿色荧光的细胞个数。

主要技术缺陷：（1）样本处理过程复杂，样本需要多次离心、洗涤去除黏液层，制成细胞悬浊液；（2）检测过程复杂，时间比较长需要1-2个小时。（3）需要使用荧光显微镜，仪器昂贵，并且需要技术人员操作。（4）定性检测到样本中的有无病毒，不能确定病毒数量。（5）只能检测感染细胞的病毒，不能检测到样本中游离的病毒；当少数病毒感染细胞时，可能因感染的病毒数量较少，未能观察到绿色荧光细胞，出现假阴性现象。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的多项呼吸道病原体检测试剂盒及其检测方法，以实现检测操作简单；检测用时短，操作简便；检测特异性强；灵敏度高的目的。

为实现上述目的，本发明采取下述技术方案来实现：

多项呼吸道病原体检测试剂盒，包括样品抽提液，样品管和多联检试剂板，

多联检试剂板包括连接板和至少一个单一试剂板；

单一试剂板包括卡板和试剂条，试剂板的外壳为卡板，试剂条位于卡板内部；

卡板的一端设有连接部，连接部与连接板可拆卸连接；

卡板上表面设有加样孔和检测窗口；

每个试剂条包括PVC板，层析膜，样品垫，结合垫和吸水材料；

卡板上的加样孔位于样品垫之上，

每个试剂条的结合垫上固定有至少一种荧光标记的呼吸道病原体的单克隆抗体，层析膜上包含有质控C线，至少一条检测T线，质控线和检测线均位于卡板的检测窗口内，C线固定有羊抗鼠的IgG的多克隆抗体，每条T线均含有一种与结合垫上荧光标记抗体相对应的抗体。

根据不同需要，本发明可以做成不同数目的多联病原体试剂盒。

进一步，试剂盒还包括样品管支架和棉签。

进一步，卡板的连接部为一凹槽，所述凹槽设置在卡板一端的侧表面上；连接板设有与凹槽相对应的凸起。

进一步，所述连接板的凸起长度为凹槽长度的至少一倍。

进一步，样品抽提液为磷酸缓冲液、Tris缓冲液、硼酸缓冲液中的一种。

进一步，所述样品抽提液中含有质量分数1%的表面活性剂TritonX-100。

本发明还提供一种多项呼吸道病原体的检测方法，包括以下步骤：

步骤a，采取待测样本；

步骤b，使用上述的试剂盒，将取出的样品放入样品管中，并加入样品抽提液混合均匀；

步骤c，分别在每个单一试剂板的加样孔中滴加步骤b中混合均匀的待测样品液进行反应；也可根据待测病原体的种类选取相应数目的试剂板；

步骤d，将反应后的试剂板插入荧光免疫分析仪器中进行检测，得到检测结果。

进一步，步骤b中加入的样品抽提液体积与样品体积比为1:1。

进一步，步骤d中仪器的检测波段为激发光波长365nm，发射光波长610nm。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明的试剂盒和检测方法是采用荧光免疫层析技术，其基本原理是免疫层析检测方法和荧光标记技术的结合，产品是采用的是抗原抗体反应方法，即将待测抗原相应的抗体固定于载体T线上，同时将荧光标记好的另一个抗体固定于结合垫上。当样本中含有待检测物质时，待检测物质和固定在结合垫上的荧光标记抗体反应，在层析至固定于T线位置上的抗体处，和该抗体反应形成复合物，在激发光的作用下，在T线位置有荧光条带出现，荧光条带的强弱与待测物质的浓度呈线性关系。

试剂板可以拆卸，即可同时检测多种呼吸道病原体，也可检测单一一种病原体。且拆卸下单一的试剂板检测时，不会对其他的试剂板造成交叉污染。

应用本发明的检测试剂盒和检测方法时，样本无需特殊处理，只需要抽提液稀释样本即可。且通过抽提液处理可以释放出细胞中的病原体。检测用时仅需要15-20min，时间短，操作简便。使用的配套仪器价格低廉，操作方便。

本产品以病原体的抗原和抗体的特异性结合反应，加之荧光物质强化特异性反应效果，大大提高了产品的性能，特异性强，灵敏度高。

在患者感染的初期（2-3天左右），仅有少量的病原体时。本试剂盒较高的特异性和灵敏度，能够准确判断病原体的阳性感染情况，在感染初期即可确定是否感染各种病原体，同时可以定量检测样本中的病原体数量，为治疗提供依据。

附图说明