[发明专利]一种同时快速测定红花中四种亚精胺成分含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药有效成分含量测定技术领域，具体属于一种同时快速测定红花中四种亚精胺成分含量的方法。

背景技术

红花是菊科红花属植物红花(CarthamustinctoriusL.)的干燥管状花，花管狭细，长约1.5厘米，橙红色。其原名为红蓝花，别名为红花樱子、草红花、刺红花、杜红花、会红花等。主要产地为新疆、河南、浙江以及四川等省，其味辛、微苦、性温、归心和肝经，能活血通经、散瘀止痛、降血压和降血脂，用于治疗经闭、痛经、心绞痛、高血压、跌打损伤、冠心病等。

红花化学成分极具多样性，至今已从中分离得到包括醌式查尔酮苷类、黄酮类、甾醇类、生物碱类、木脂素类、有机酸类、烷基二醇类以及多炔类等250多种化学成分。亚精胺类化合物是指具有H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH₂结构单元的多胺类化合物，目前已从红花中分离鉴定四种亚精胺类成分：N1,N5,N10-(Z)-tri-p-coumaroylspermidine(1)、N1,N5-(Z)-N10-(E)-tri-p-coumaroylspermidine(2)、N1(E)-N5-(Z)-N10-(E)-tri-p-coumaroylspermidine(3)、和N1,N5,N10-(E)-tri-p-coumaroyl-spermidine(4)。

四种亚精胺成分的结构式：

亚精胺类成分具有抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、抗菌等广泛的生物活性。从红花中分离鉴定亚精胺成分N1,N5-(Z)-N10-(E)-tri-p-coumaroylspermidine(即本专利中的化合物2)显示出对5-HT再摄取有很强选择性抑制活性，具有治疗抑郁症前景。由于亚精胺存在众多同分异构体，在分析、分离、鉴定上存在许多困难。目前关于红花中亚精胺快速分离制备已有专利报道(中国专利：一种运用高速逆流色谱从红花中分离制备亚精胺的方法，申请号：201310396939.X)。而有关红花中亚精胺类成分含量测定方法未见报道，尤其同时快速测定红花中四种亚精胺含量的方法未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时快速测定红花中四种亚精胺成分N1,N5,N10-(Z)-tri-p-coumaroyl-spermidine(1)、N1,N5-(Z)-N10-(E)-tri-p-coumaroylspermidine(2)、N1(E)-N5-(Z)-N10-(E)-tri-p-coumaroylspermidine(3)、和N1,N5,N10-(E)-tri-p-coumaroyl-spermidine(4)含量的方法。该方法应稳定、可靠、易操作，不仅能完善红花药材质量控制的方法，同时还能为亚精胺类物质分析提供可靠的检测方法。

本发明提供的一种同时快速测定红花中四种亚精胺成分含量的方法，包括如下步骤：

1)称取红花药材粉末(过60目筛)1.0000g，置于100ml棕色的具塞锥形瓶中，加入15ml甲醇，称定重量，超声处理(超声频率40KHz，功率比91％，超声温度25℃)10min，放冷后再次称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀、过滤，得到红花供试品溶液，再过0.45μm微孔滤膜后待测；

2)用Agilent液相色谱仪测定，色谱条件：分析柱为AgilentC₁₈色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)，流动相为有机溶剂/水等度洗脱，洗脱流速为1.0ml/min，柱温30℃，检测波长210-360nm，进样体积为10μl；

3)将四种亚精胺成分所对应的峰面积分别带入以下公式计算其含量；Y＝40317x-51.630，Y＝35750x-29.313，Y＝38854x-50.026，Y＝48600x-67.042；

所述的四种亚精胺成分：N1,N5,N10-(Z)-tri-p-coumaroyl-spermidine(1)、N1,N5-(Z)-N10-(E)-tri-p-coumaroylspermidine(2)、N1(E)-N5-(Z)-N10-(E)-tri-p-coumaroylspermidine(3)、和N1,N5,N10-(E)-tri-p-coumaroyl-spermidine(4)。

所述的有机溶剂为甲醇，洗脱梯度为47％甲醇。