[发明专利]微生物发酵补料生产谷氨酰胺的方法

权利要求书

1.微生物发酵补料生产谷氨酰胺的方法，其特征在于，以谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)作为发酵菌株，通过补料批式发酵生产谷氨酰胺；其中，在发酵过程中向发酵液中补加的营养成分为硫酸铵、麸皮水解液；

所述麸皮水解液的制备方法为：将干麸皮和水按1:20的重量比混合置于发酵罐中，用盐酸调pH值1.0，在0.25Mpa，90-121℃的条件下水解20min，放罐后降至室温，过滤取上清液，即得；

发酵所用的培养基组成为：葡萄糖10-15g/L、玉米浆水解液1-1.5g/L、氯化铵3-6g/L、磷酸二氢钾0.02-0.04g/L、磷酸氢二钾0.02-0.04g/L、维生素B1 20-25μg/L、硫酸锌4-8mg/L、硫酸亚铁4-8mg/L、生物素4-7μg/L、泡敌0.3g/L；

发酵条件为：29-32℃，通气量0.5-1.5VVM，溶氧量控制在30％以上，罐压0.01-0.05Mpa，pH6.5-7.5，发酵周期60-72h；

发酵时按8-10％的接种量将种子液接种于发酵罐中，发酵罐容积为50L，装液量为35L，补加硫酸铵和麸皮水解液的量分别为900g-1500g、3000-4500mL，将补加的营养成分加水配制成6kg-9kg，蒸汽灭菌后流加至发酵罐中；

自发酵10-16h开始补加营养成分至发酵50-65h时停止；

发酵所用的菌株为保藏编号CICC 20973的谷氨酸棒杆菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，种子液的制备方法如下：

i)斜面培养：用接种环挑取谷氨酸棒杆菌接种于斜面培养基上，29-37℃培养8-20h；斜面培养基的组成为：蛋白胨4-6g/L、牛肉浸取物2-4g/L、氯化钠4-6g/L、琼脂14-16g/L，pH为6.8-7.0；

ii)种子液的制备：刮取斜面培养基上的菌种接种于种子培养基中，29-37℃培养10-18h，即得OD_562nm大于0.8的种子液；种子培养基的组成为：葡萄糖20-30g/L，尿素3-7g/L，硫酸镁0.3-0.5g/L，磷酸二氢钾0.8-1.6g/L，玉米浆25-35g/L，硫酸亚铁1.5-2.5ppm，硫酸锰1.5-2.5ppm，pH6.5-7.0。