[发明专利]45型重组人乳头瘤病毒病毒样颗粒及其制备方法有效
| 申请号： | 201510490367.0 | 申请日： | 2015-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN106701798B | 公开（公告）日： | 2021-09-17 |
| 发明（设计）人： | 刘永江;银飞;伍树明;高文双;陈晓;王雅君;姜绪林;张瑞霞;高俊;张海江;李闯;刘玉莹;陈丹;沈迩萃;夏丽 | 申请（专利权）人： | 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/37 | 分类号： | C12N15/37;C12N15/70;C12N1/21;C12N7/04;C07K14/025;C07K19/00;A61K39/12;A61K38/16;A61P31/20 |
| 代理公司： | 北京商专永信知识产权代理事务所(普通合伙) 11400 | 代理人： | 欧阳石文 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 45 重组 乳头 病毒 颗粒 及其 制备 方法 | ||
1.一种经大肠杆菌偏好密码子优化的编码人乳头瘤病毒HPV45 L1的融合基因，其特征在于，优化的编码人乳头瘤病毒HPV45 L1的基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，并融合有编码GST-SUMO的编码核苷酸序列。
2.如权利要求1所述的融合基因，其特征在于，该融合基因编码的氨基酸序列如SEQ IDNO：9所示。
3.如权利要求1所述的融合基因，其特征在于，该融合基因的核苷酸序列如为SEQ IDNO：4所示。
4.一种大肠杆菌表达载体，其特征在于该载体包括具有权利要求1至3任一项所述融合基因。
5.如权利要求4所述的大肠杆菌表达载体，其特征在于该载体为pGEX-6p-1、pGEX-4T-2、 pMAL或pET28a。
6.一种工程菌细胞，该细胞包含权利要求1至3任一项所述的融合基因，或权利要求4、5所述的大肠杆菌表达载体。
7.如权利要求6所述的工程菌细胞，其特征在于，为GI698，ER2566，BL21 (DE3)，XA90，B834 (DE3)或BLR (DE3)。
8.一种由权利要求1至3任一项所述的融合基因编码的融合蛋白。
9.如权利要求8所述的融合蛋白，其特征在于其氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示。
10.一种HPV45 L1五聚体蛋白质的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
用亲和层析方法吸附如权利要求8或9所述的融合蛋白；
加入SENP1蛋白质水解酶切除Tag标签，得HPV45 L1五聚体蛋白质；
纯化HPVL1五聚体蛋白质、得纯度98%，平均粒径10～15nm PdI0.1的L1五聚体蛋白质。
11.一种HPV45 L1 VLP的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
将平均粒径10～15nm PdI0.1的如权利要求10所述的方法制备得到HPV L1五聚体蛋白质与组装缓冲液混合，混合后pH值为5.0～5.9，盐浓度为500～2000 mM，最终获得平均粒径45～65nm PdI0.1的HPV45 L1 VLP蛋白质液。
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