[发明专利]小鲵科动物皮肤显微组织切片的制备方法

权利要求书

1.小鲵科动物皮肤显微组织切片的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）脱水：将经固定处理的小鲵科动物皮肤组织依次浸入浓度梯度50%、70%、80%、90%、95%、100%的乙醇中脱水，其中95%、100%乙醇各重复两次，每个梯度脱水45~60min；

（2）透明：将经脱水处理的皮肤组织浸入100%乙醇与二甲苯的混合液中2~3min，取出后再浸入二甲苯中10~30min；所述100%乙醇与二甲苯的体积比为1:1；

（3）浸蜡：将经透明处理的皮肤组织放入二甲苯与石蜡的混合液中20~30min，取出后再分两次放入石蜡中，每次45~60min；所述二甲苯与石蜡的体积比为1:1；

（4）将经浸蜡处理的皮肤组织包埋，依次经切片、展片、贴片、烤片、染色、封固处理，即得；所述切片的厚度为4~6μm，切片后置于42~45℃的水中展片；所述贴片、烤片为：待切片自然伸展平后从水中取出，控干水分，置于37~45℃下干燥2~4h，或者于室温下自然干燥一夜；

步骤（4）中所述染色为H.E染色，操作步骤为：将切片依次置于二甲苯Ⅰ10min、二甲苯Ⅱ10min、100%乙醇Ⅰ5min、100%乙醇Ⅱ5min、95%乙醇5min、85%乙醇5min、75%乙醇5min、水5min、苏木精染液10~20min，流水冲洗5min，再置于HCl-乙醇分化液20~40s，流水冲洗10~30min，镜检，流水冲洗2min，再依次置于70%乙醇1min、85%乙醇1min、伊红染液2min、95%乙醇Ⅰ2min、95%乙醇Ⅱ2min、100%乙醇Ⅰ2min、100%乙醇Ⅱ2min、二甲苯Ⅰ5min、二甲苯Ⅱ5min。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述苏木精染液为：将1g苏木精溶于20mL 100%乙醇中得甲液，50g钾明矾溶于300mL蒸馏水中得乙液；将甲液、乙液混合，煮沸2~3min，再加蒸馏水定容至1000mL；最后加入0.2g碘酸钠，即得。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述伊红染液为：将0.5g伊红加入到100mL 85%乙醇中，溶解完全，即得。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述HCl-乙醇分化液为：将1mL盐酸加入到99mL 70%乙醇中，混匀，即得。