[发明专利]一种秋茄叶总黄酮的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于生物分离技术领域，具体是指一种秋茄叶总黄酮的分离纯化方法。

背景技术

秋茄（Kandeliacandel）为红树科秋茄属植物，为我国红树植物中最耐寒的树种，在我国红树植物分布区自南向北，红树植物种类逐渐减少，只有秋茄还有分布，达到最北端28o25'N。秋茄中的化学成分主要有黄酮类、鞣质类、甾醇类、脂肪酸和多糖等。近年来诸多学者对秋茄中的各种化学成分研究，发现了一些具备药物开发价值的功用，例如学者李宝才在《红树林秋茄叶类脂化学及活性物质的研究》一文中报道：秋茄叶总黄酮，含量为29.3%，有抗氧化作用，能明显降低四氧嘧啶所致高过氧化脂质小鼠血清MDA值。此外，经研究发现，秋茄叶总黄酮具有较好的抑制黑色素生成、抑制酪氨酸酶活性、抗氧化和抗紫外作用，且作用的强弱与秋茄叶总黄酮的纯度有一定的关联。

现有的秋茄叶总黄酮的制备方法，主要有：其一，采用秋茄叶粉末1kg用5L60%乙醇浸渍4次，浓缩除去乙醇后离心取上清液，再通过AB-8大孔离子交换树脂，用去离子水冲洗柱子至清亮，再用75%乙醇冲洗，收集乙醇液，回收乙醇，干燥，得到总黄酮45.3g，总黄酮的含量为17.8%；或者采用1kg秋茄叶粉末用5L60%乙醇浸渍4次，浓缩除去乙醇后离心取上清液，再通过DA201大孔离子交换树脂，用去离子水冲洗柱子至清亮，再用80%乙醇冲洗，收集乙醇液，回收乙醇，干燥，得粗黄酮50.2g，总黄酮的含量为18.9%。将上述粗黄酮45g，研磨成粉，用500ml乙醇/三氯甲烷（3:17）混合溶剂，萃取2次，离心取上清液。残余物用500ml乙醇/三氯甲烷（1:1）萃取2次，离心，取上清液。合并所有离心液，回收溶剂，干燥，得精制黄酮9.6g，黄酮含量为29.3%。以上对两种纯化方法进行例举，上述两种方法的主要缺点在于：所得到的总黄酮纯度低，过完大孔树脂后，纯度都小于20%，即使用大量的有毒有机溶剂萃取后，总黄酮含量也没超过30%，影响药物开发功效，且采用有毒有机溶剂萃取也易引发环境污染的隐患。

基于此研究并开发设计了一种秋茄叶总黄酮的分离纯化方法。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种秋茄叶总黄酮的分离纯化方法。

本发明通过下述技术方案实现：一种秋茄叶总黄酮的分离纯化方法，包括以下步骤：

（1）取秋茄叶粉碎成粗粉，用15倍的65~75%的乙醇溶液提取2次，每次的提取时间为1.0~2.0h，合并提取液；

（2）浓缩步骤（1）所得的提取液使其浓度为4~5mg/ml，离心，取上清液，用非极性大孔吸附树脂纯化，吸附30min，水洗除杂，再用40~70%的乙醇洗脱；

（3）收集步骤（2）所得的洗脱液，减压回收溶剂，干燥，粉碎，即得本品，所述本品中秋茄叶总黄酮的含量至少为60%。

进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以下技术特征，所述步骤（1）中所述非极性大孔吸附树脂为HPD722型、HPD100型、HPD826型吸附树脂中的任意一种。

进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以下技术特征，所述步骤（2）中非极性大孔吸附树脂为HPD722型。

进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以下技术特征，所述步骤（1）的提取时间1.0h，提取温度60~80℃。

进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以下技术特征，所述步骤（2）上样流速为2~3BV/h，上样量为4.5~6.5BV。

进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以下技术特征，所述步骤（2）采用70%的乙醇洗脱。

进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以下技术特征，所述步骤（2）乙醇洗脱时的洗脱流速为3～6BV/h，洗脱液用量为3~5BV。

进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以下技术特征，所述步骤（2）乙醇洗脱时的洗脱流速为5BV/h，洗脱液用量为4BV。

本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：

本发明提供的一种秋茄叶总黄酮的分离纯化方法，方法简便、高效、环保，且针对性强，能获得高纯度的、美白祛斑活性强的秋茄叶总黄酮。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。