[发明专利]溶菌酶-抗菌肽融合蛋白的新应用

说明书

技术领域

本发明属于生物化学领域，具体涉及溶菌酶-抗菌肽融合蛋白的新应用，特别涉及溶菌酶-抗菌肽融合蛋白在制备治疗创面的药物中的应用。

背景技术

创面是正常皮肤(组织)在外界致伤因子(如外科手术、外力、热、电流、化学物质、低温)以及机体内在因素(如局部血液供应障碍)等作用下所导致的损害，常伴有皮肤完整性的破坏以及一定量正常组织的丟失，同时，皮肤的正常功能受损，也称为伤口或者创伤。创面可以分为急性创面和慢性创面。一般认为急性创面是指自创面形成的前2个星期内的所有创面。常见的急性创面有手术切口、皮肤擦伤、烧伤、供皮区。之后由于某些不利的影响因素如感染、异物等导致创面愈合过程受阻，愈合过程部分或完全停止，使创面愈合时间超过2个星期的创面称之为慢性创面。常见的慢性创面有压迫性溃疡(褥疮)、下肢血管性(动脉性/静脉性)溃疡、糖尿病性溃疡、其它难愈合创面。

近年来，随着我国逐渐进入老龄化社会行列，慢性创面患者明显增多。在我国，慢性创面患者占外科住院患者的1.5％-3.0％，主要为创伤感染(67.5％)、压迫性溃疡(9.2％)、静脉性溃疡(6.5％)、糖尿病溃疡(4.9％)和其他(11.9％)。慢性创面可能不会立即威胁患者生命，但如果久治不愈，则严重影响患者和家人和其他的生活质量，甚至会引发感染扩散，导致脓毒症等并发症，从而危及生命。而在所有慢性创面中糖尿病溃疡更难愈合，已成为非创伤性截肢手术的首要原因。

糖尿病溃疡是指糖尿病患者由于合并神经病变及各种不同程度末梢血管病变而导致皮肤感染、溃病形成和(或)深部组织的溃破。临床所见糖尿病病人的溃疡，并非局限于足部，但96％发生在四肢末端,尤以足部为主，因此国际上称为糖尿病足。世界卫生组织最新流行病学调查结果显示，2010年世界人口的6.4％患有糖尿病，涉及2.85亿人，预计至2030年糖尿病发病率会升至7.7％，涉及4.39亿人。在糖尿病患者中有15％～20％的患者在其病程中会发生足溃疡或坏疽。而糖尿病足一般较难愈合，容易恶化发展至截肢，而截肢后5年生存率低于乳腺癌和前列腺癌。所以对糖尿病足等慢性创面应及时采取有效措施治疗。

目前，针对糖尿病足等慢性创面的形成机理，主要治疗方法是局部抗感染，同时促进有关内源性生长因子的分泌以促进血管新生、促进缺损组织的修复。现有的外科治疗方法主要有高压氧、局部激光照射、综合物理疗法、自体干细胞移植、应用血小板衍生因子、应用中药外用制剂等。同时进行系统的内科基础治疗，包括：①针对糖尿病性溃疡，严格控制血糖；②控制感染；③改善微循环、改善全身营养状况和改善神经功能；④对症治疗、纠正酸中毒等。

而现有专利还公开了通过利用生长因子促进皮肤组织愈合的药物制剂。如中国专利CN1426813A公开了重组人表皮生长因子喷雾剂及制备方法；中国专利CN101053657A公开了治疗顽固性皮肤溃疡的外用制剂，其中含有表皮生长因子、抗菌药物及胰岛素；美国已经上市药物Regranex的有效成分为重组人血小板源生长因。

虽然上述这些方法和药物具有一定疗效，但均不能同时满足抗感染和促进有关内源性生长因子分泌的要求，效果都十分有限达不到快速愈合的目标。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的缺点，提供了溶菌酶-抗菌肽融合蛋白在制备治疗创面的药物中的应用。

本发明首先通过中和剂鉴定试验和杀菌实验检测溶菌酶-抗菌肽融合蛋白的杀菌效果。结果显示所用中和剂溶液可有效中和溶菌酶-抗菌肽融合蛋白，且中和剂溶液和中和产物溶液对金黄色葡萄球菌的生长基本无影响。在20℃±1℃条件下，溶菌酶-抗菌肽融合蛋白作用5.0min，对金黄色葡萄球菌平均杀灭对数值＞5.00，符合消毒技术规范的要求。表明溶菌酶-抗菌肽融合蛋白具有很好的杀菌效果。

在一个具体实施方式中，本发明通过细胞划痕检测溶菌酶-抗菌肽融合蛋白对血管内皮细胞迁移的效果。结果显示溶菌酶-抗菌肽融合蛋白处理组血管内皮细胞比生理盐水对照处理组向周边迁移的快。表明溶菌酶-抗菌肽融合蛋白具有刺激血管内皮细胞迁移的效应。

由于糖尿病溃疡是所有创面中最难愈合，因此在一个具体实施方式中，本发明选择糖尿病大鼠动物模型，考察溶菌酶-抗菌肽融合蛋白对创面愈合的影响。结果显示溶菌酶-抗菌肽融合蛋白具有促进糖尿病大鼠创面愈合的效果，可促进肉芽肿内毛细血管的新生，可以促进创面组织分泌内源性的细胞生长因子EGF的表达。