[发明专利]一种溶解难溶多肽的偶联肽链及其在液相色谱中分离纯化的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程和多肽生产领域，具体的说涉及一种溶解难溶多肽的偶联肽链及其在液相色谱中分离纯化的应用。

背景技术

溶解性是研究蛋白质和多肽会遇到比较重要的问题，每个氨基酸都有其固有的化学特性。如亮氨酸、异亮氨酸、颉氨酸是疏水性的，而赖氨酸、组氨酸、精氨酸是亲水性的。难溶多肽主要是其包含的难溶氨基酸引起的，一般来说，难溶氨基酸占多肽比例超过75％就会造成多肽的难溶。

在多肽生产和制备方面，难溶性一直是多肽分离纯化步骤的一大难题。多肽主要的纯化手段是反相高效液相色谱，其具有分离效果好，分辨率高回收率高的特点。反相高效液相色谱在对多肽进行分离纯化时，需要将多肽完全溶解到溶剂中，最适合的常规溶剂为H₂O、ACN，这样才能利用反相高效液相色谱进行有效的分离纯化，但难溶多肽给广大科研人员在该操作带来极大麻烦。

现有解决难溶多肽纯化的方法只能选择优良的有机溶剂(如：DMSO，DMF)去溶解多肽，然后进行反相高效液相色谱分离纯化。而DMF或DMSO是通过破坏多肽的二级结构助溶，会导致高效液相色谱分离效果大大降低，且对难容肽链的溶解能力有限。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种用于溶解难溶多肽的的偶联肽链；本发明还有一个目的是提供前述偶联肽链在溶解难溶多肽上的应用。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明的一种溶解难溶多肽的偶联肽链如式(I)所示：

X-Ph-Y-(B)_n   (I)，

其中，Ph表示1,4位被取代的苯环；

X表示羟基或C1-C4的单羟基烷基；

Y表示与(B)_n发生脱水缩合反应后形成的羰基或C2～C4羰基烷基；

(B)_n表示n个相同或不同的亲水氨基酸缩合组成的亲水多肽链，n为难溶多肽氨基酸数的1.2～2倍。

具体地说，式(I)所述X为直链或支链的–CH₂OH、–CH₂CH₂OH、–CH₂CH₂CH₂OH、–CH₂CH₂CH₂CH₂OH的任意一种；所述Y为直链或支链的–CH₂CO–、–CH₂CH₂CO–或–CH₂CH₂CH₂CO–的任意一种。

X-Ph-Y原本来自于1,4位分别被单羟基烷基和单羧基烷基取代的苯环。羧基的-OH与(B)_n的氨基脱水缩合形成肽链，因此通式(I)的Y为直链或支链的–CH₂CO–、–CH₂CH₂CO–或–CH₂CH₂CH₂CO–的任意一种。

本发明的耦合肽链中，X–Ph–Y是将亲水多肽链和难溶多肽链耦合的“连接臂”，该“连接臂”来自4-羟基苯甲酸、对羟甲基苯甲酸、4-(2-羟乙基)苯甲酸、4-(3-羟基丙基)苯甲酸、4-(4-羟基丁基)苯甲酸、对羟基苯乙酸、4-(羟甲基)苯乙酸、对羟基苯丙酸、3-[4-(羟基甲基)苯基]丙酸、4-(4-羟基苯基)丁酸、2-(4-羟基苯)丙酸、3-(4-羟基苯基)丁酸、2-[(4-羟基苯基)甲基]氨基丁酸、4-(1-羟基乙基)-苯甲酸的任意一种，通过脱水缩合反应与亲水多肽链的N端连接。

另外，本发明的耦合肽链中，亲水氨基酸包括但不限于精氨酸、赖氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、组氨酸、脯氨酸中的任意一种，这些氨基酸如下表1所示，疏水参数很小；而所述的难溶多肽链，可以理解为包含难溶氨基酸且在液相色谱中溶解度很低或难溶的多肽链，难溶氨基酸包括丙氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸的任意一种，这些氨基酸如表2所示，疏水参数大，含有这些氨基酸的多肽链一般溶解度都非常低。

表1 亲水氨基酸列表