[发明专利]一种骆驼刺组织培养的快速分化培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于植物培养技术领域，具体涉及一种骆驼刺组织培养的快速分化培养基及其制备方法。

背景技术

骆驼刺(学名:AlhagisparsifoliaShap.)属豆科、落叶草本，主要枝上多刺，叶长圆形，花粉红色，6月开花，8月最盛，每朵花可开放20余天，结荚果，总状花序，根系一般长达20米。从沙漠和戈壁深处吸取地下水份和营养，是一种自然生长的耐旱植物，因为这种植物茎上长着剌状的很坚硬的小绿叶，故叫骆驼剌，是草本植物，是戈壁滩和沙漠中骆驼唯一能吃的赖以生存的草，故又名骆驼草，主要分布在内陆干旱地区。

骆驼刺根系十分发达，根系一般长达20米，是地表上茎叶半径的2倍甚至3倍，这在植物界是极其罕见的。因为其特殊的生理特性，在分化培养基中如果加入常用生长素吲哚乙酸在低浓度无法快速促进茎叶分化，在培养基的时间过长容易感染细菌导致培养失败，如果加入常用生长素吲哚乙酸的浓度过高，又抑制了根系的生长发育，导致组织培养的骆驼刺根系发育不全,因此需要组织培养骆驼刺必须解决其快速分化问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种骆驼刺组织培养的快速分化培养基及其制备方法。

本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：

一种骆驼刺组织培养的快速分化培养基，所述的分化培养基为1/2MS培养基中加入如下组份：特制固化剂、红糖、6-苄氨基腺嘌呤、4-氯-IAA、四环素、活性炭、植物提取物、木瓜汁配制而成，在分化培养基中的浓度分别为：特制固化剂15-18g/L、红糖20-25g/L、四环素25-45mg/L、6-苄氨基腺嘌呤2.6-2.8mg/L、4-氯-IAA0.4-0.5mg/L、植物提取物60-90mg/L、木瓜汁60-80g/L、活性炭3-4g/L。

进一步的，所述的特制固化剂：包括海藻酸钠和紫薯提取物，其制备方法为，将新鲜的紫薯进行压榨，收集浆汁，然后将浆汁真空干燥获得凝固的块状物，再将块状物粉碎至粒径150-300目的粉状，即为紫薯提取物；所述的特制固化剂为海藻酸钠与紫薯提取物质量比2:3。

更进一步的，植物提取物提取于大叶榕气生根，所述的植物提取物的提取方法为收集大叶榕气生根，放入搅拌机，并按照质量体积比1:1kg/L添入乙酸-乙醇水溶液并进行组织破碎，然后将破碎液过300目滤布后收集滤液，再将滤液真空干燥后收集获得的粉末即为所述的植物提取物，其中所述的乙酸-乙醇水溶液为质量浓度为45%的乙醇和质量浓度为12%的乙酸按照1:2的体积比混合。

一种骆驼刺组织培养的快速分化培养基的制备方法，具体操作为：向1/2MS培养基中加入特制固化剂、红糖、6-苄氨基腺嘌呤、4-氯-IAA、四环素、活性炭；在分化培养基中的浓度分别为特制固化剂15-18g/L、红糖20-25g/L、四环素25-45mg/L、6-苄氨基腺嘌呤2.6-2.8mg/L、4-氯-IAA0.4-0.5mg/L、活性炭3-4g/L、植物提取物60-90mg/L，并将其置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为113摄氏度，压力103.42kPa，时长25-35min，最后再将木瓜汁加入其中。

所述木瓜汁在添加前需要经过68℃、时长30min的加热灭菌，加热后将其温度急速冷却到1-3℃，保持时长为5-10min，然后即可按照浓度为60-80g/L添入分化培养基中。

以上所述的制备过程均在无菌环境中操作。

本发明具有如下有益效果：

本发明针对骆驼刺特殊的生长和生理特性，特选海藻酸钠和紫薯提取物制备的固化剂。

本发明进一步在分化培养基中添加四环素，在培养过程中，可进一步对外植体的内生菌产生明显的抑制作用，可减少组培过程中的污染，而且还起到了促进腋芽萌发，缩短萌动时间的效果。

本发明进一步在分化培养基中添加植物提取物，提取于大叶榕气生根的提取物配合4-氯-IAA可有效均衡骆驼刺腋芽、根和茎的生长，而且对腋芽萌发和芽体发育有明显的促进作用。

应用本发明的分化培养基进行培养骆驼刺，成活率为98-99%，染菌率为1.7-2.1%，培养基褐化程度较MS培养基低12-16%，萌动时间大约缩短了20-43%。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行详细的说明。

实施例：

本发明选用的1/2MS培养基成分及其用量（用量是指在1升1/2MS培养基中的用量）如下表1：