[发明专利]将癌细胞转变成癌干细胞的方法及其应用

权利要求书

1.一种将癌细胞转变成癌干细胞的方法，其特征在于，包括使所述癌细胞的基因组上具有(1)～(3)三个突变的步骤：

(1)MLL2基因chr12:49420183C>G，

(2)ARID1A基因chr1:27093001G>A，

(3)GPRC5A基因chr12:13061979T>G，

其中，所述癌细胞为膀胱癌细胞，所述癌干细胞为膀胱癌干细胞。

2.权利要求1的方法，其特征在于，包括使所述癌细胞的基因组上具有以下17个突变中的至少之一的步骤：

ATM基因chr11:108186754C>A，CREBBP基因chr16:3790519C>A，ERCC2基因chr19:45867687T>C，ETS1基因chr11:128333418A>G，FAT4基因chr4:126329890T>C，GPRC5A基因chr12:13061979T>G，LRP2基因chr2:170096229G>A，MAP3K6基因chr1:27687466G>T，MKL1基因chr22:40807506G>A，PAWR基因chr12:79990409G>T，PITX2基因chr4:111542524C>G，RNF213基因chr17:78293189A>T，SIN3A基因chr15:75664469C>T，STAG2基因chrX:123220567C>G，TP53基因chr17:7577100T>C，USP24基因chr1:55638075G>A和ZBTB17基因chr1:16270382G>T。

3.权利要求1的方法，其特征在于，利用CRISPR系统以及单链DNA模板使所述癌细胞的基因组上具有所述突变。

4.权利要求3的方法，其特征在于，所述CRISPR系统为LentiCRISPRv2质粒。

5.权利要求3的方法，其特征在于，所述CRISPR系统包括能够与所述突变所在的位置结合的双链DNA，

为使所述癌细胞的基因组上具有MLL2基因chr12:49420183C>G突变，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：1和2，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：3，

为使所述癌细胞的基因组上具有ATM基因chr11:108186754C>A，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：4和5，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：6，

为使所述癌细胞的基因组上具有CREBBP基因chr16:3790519C>A，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：7和8，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：9，

为使所述癌细胞的基因组上具有ERCC2基因chr19:45867687T>C，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：10和11，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：12，

为使所述癌细胞的基因组上具有ETS1基因chr11:128333418A>G，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：13和14，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：15，

为使所述癌细胞的基因组上具有FAT4基因chr4:126329890T>C，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：16和17，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：18，

为使所述癌细胞的基因组上具有GPRC5A基因chr12:13061979T>G，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：19和20，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：21，

为使所述癌细胞的基因组上具有LRP2基因chr2:170096229G>A，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：22和23，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：24，

为使所述癌细胞的基因组上具有MAP3K6基因chr1:27687466G>T，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：25和26，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：27，

为使所述癌细胞的基因组上具有MKL1基因chr22:40807506G>A，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：28和29，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：30，

为使所述癌细胞的基因组上具有MLL2基因chr12:49420183C>G，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：31和32，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：33，

为使所述癌细胞的基因组上具有PAWR基因chr12:79990409G>T，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：34和35，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：36，

为使所述癌细胞的基因组上具有PITX2基因chr4:111542524C>G，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：37和38，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：39，

为使所述癌细胞的基因组上具有RNF213基因chr17:78293189A>T，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：40和41，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：42，

为使所述癌细胞的基因组上具有SIN3A基因chr15:75664469C>T，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：43和44，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：45，

为使所述癌细胞的基因组上具有STAG2基因chrX:123220567C>G，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：46和47，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：48，

为使所述癌细胞的基因组上具有TP53基因chr17:7577100T>C，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：49和50，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：51，

为使所述癌细胞的基因组上具有USP24基因chr1:55638075G>A，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：52和53，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：54，

为使所述癌细胞的基因组上具有ZBTB17基因chr1:16270382G>T，所述双链DNA的两条链分别为SEQ ID NO：55和56，所述单链DNA模板为SEQ ID NO：57。

6.一种膀胱癌干细胞，其为利用权利要求1-5任一方法作用膀胱癌细胞而获得。