[发明专利]一种甜菜碱含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于化学分析技术领域，尤其是涉及一种甜菜碱含量的测定方法。

背景技术

甜菜碱(三甲铵基乙酸)为一种氨基酸──甘氨酸的三甲基衍生物，化学式为C₅H₁₁NO₂，甜菜碱分子具有三个有效甲基，呈中性，熔点高达200℃，极易溶于水，易溶于甲醇。有文献报道，甜菜碱-高半胱氨酸转甲基酶对维生素B₁₂的大量合成具有非常重要的作用。甜菜碱-高半胱氨酸转甲基酶催化甜菜碱向高半胱氨酸转移一个甲基，分别形成二甲基甘氨酸和甲硫氨酸，因此甜菜碱在参与维生素B₁₂生物合成过程中的甲基化具有非常重要的作用。另外，甜菜碱是一种良好的渗透压调节剂，能促进细胞表面对代谢产物的分泌，从而对细菌产维生素B₁₂具有刺激效果。在保持足够的甲基供应的前提下，较低浓度的甜菜碱有利于维生素B₁₂的合成。对胞内外产物浓度的比较发现，在产物大量合成期，低浓度甜菜碱能够明显促进胞外产物的积累。因此，对于维生素B₁₂发酵液中的甜菜碱含量的测定就显得尤为重要。

甜菜碱的结构如下：

目前甜菜碱的检测方法有酸碱滴定法、比色法、重量法、薄层扫描定量法、凯氏定氮法、高氯酸非水滴定法、分光光度法、气相色谱法、离子色谱法等，这些方法各具优劣：

《中国药典》2005年版收有甜菜碱薄层色谱法含量测定，但该方法干扰因素多，而且温度和湿度对显色影响较大，重现性差，另有将甜菜碱制成衍生物，再进行高效液相色谱法进行测定甜菜碱的测定。

分光光度法将甜菜碱样品与显色剂发生显色反应而生成有色物质，再使用分光光度计进行定量测定。样品与冷却的KI混合产生碘化物沉淀，离心后用二氯乙烷溶解沉淀，在波长为365nm处测定吸光度，通过工作曲线计算出甜菜碱含量，该法干扰因素较多，特别是在测定低含量样品时误差较大。

《兽药质量标准2003》中《盐酸甜菜碱》、NY399-2000、GB/T21515-2008分别是甜菜碱盐酸盐和甜菜碱产品质量标准，含量检测采用高氯酸非水滴定法。该法是利用甜菜碱盐酸盐为季胺盐类化合物，用冰醋酸为溶媒，与乙酸汞可形成难电离的氯化汞，并形成季铵醋酸盐而具有明显的碱性，以结晶紫为指示剂，用高氯酸进行非水滴定。但是该法采用结晶紫指示剂，终点颜色变化不明显，较难判定终点；采用的高氯酸和冰醋酸有很强的腐蚀性；高氯酸标准溶液放置过久会变成黄色，对化验室外部环境控制要求较高，受环境温度、湿度影响较大，要经常配制、标定。利用此法进行检测只要样品中具有碱性基团的化合物如胺类、氨基酸类、含氮杂环化合物、某些有机碱的盐及弱酸盐、钠离子等，都会影响高氯酸非水滴定法检测的准确性。

以上的各种方法，不仅过程复杂，而且会使用腐蚀性试剂，对于甜菜碱含量的测定都不是很理想。因此开发一种能够安全、准确测定甜菜碱的含量的方法一直是有待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种干扰因素少，安全可靠，且方法简易于操作，结果准确，重复性好的甜菜碱含量的测定方法。

为实现上述发明目的所采取的的技术方案为：

一种甜菜碱含量的测定方法,其特征在于采用高效液相色谱法进行检测。

所述高效液相色谱法进行检测的具体过程为：采用纯化水为溶剂制备标准品溶液和供试品溶液，以10-20ul的进样量进样后，按照外标法计算含量；

其中高效液相色谱条件为：

色谱柱：C18色谱柱，

检测器：DAD检测器，

流动相：0.05mol/L己烷磺酸钠溶液：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液＝50.0-60.0:40.0-50.0，

流速：0.60-1.00ml/min；

检测波长：190-196nm。

所述标准品溶液和供试品溶液浓度为0.1mg/ml-2.0mg/ml。

本发明采用高效液相色谱法进行甜菜碱的含量检测，其方法简单，操作简便，安全可靠。且通过外标法对样品中甜菜碱含量进行定量，方法准确，简单、重复性好，灵敏度高，当甜菜碱在0.1mg/ml-2.0mg/ml之间时，均有较好的线性关系，其线性相关系数为0.9991。优于高氯酸滴定法、薄层色谱法和分光度法，为甜菜碱的准确测定提供优良的检测方法。

附图说明

图1为峰面积和浓度的线性关系图。

具体实施方式