[发明专利]一种生物法制备莫西沙星侧链的方法

权利要求书

1.一种下式2化合物的制备方法：

其特征在于，该方法包括：

(1)利用转氨酶催化下式4化合物，形成式3化合物，

和

(2)由式3化合物自发闭环而得到式2化合物；

其中，式2、3和4中，R选自：

其中，所述转氨酶选自：节杆菌(Arthrobacter sp.)、土曲霉(Aspergillus terreus)、河流弧菌(Vibrio fluvialis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)、海王生丝单胞菌(Hyphomonas neptunium)、青紫色素杆菌(Chromobacterium violaceum)中的ω-转氨酶，所述转氨酶的序列如SEQ ID NO:18－20中任一所示，或与SEQ ID NO:18－20中任一序列具有至少90％的序列相同性。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应在含有有机溶剂、氨基供体、缓冲溶液、转氨酶和转氨酶的辅酶的体系中进行。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂选自：DMSO、乙腈、二甲基四氢呋喃、甲基叔丁基醚和DMF中的一种或多种。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法具有以下特征中的任意一个或其任意组合：

(a)所述辅酶为磷酸吡哆醛(PLP)；

(b)步骤(1)的反应在pH为7.0-10.0的条件下进行；

(c)步骤(1)的反应温度为30～45℃；

(d)反应时间为8～24小时；

(e)所述转氨酶与式4化合物的重量配比为1：1～20；

(f)有机溶剂占反应体系的体积比为0～30％；

(g)辅酶与转氨酶的重量配比为0.02～0.2：1；

(h)氨基供体与式4化合物的摩尔比为1～5：1；和

(i)以反应体系总体积计，式4化合物的浓度为1～120g/L。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法具有以下特征中的任意一个或其任意组合：

(i)所述转氨酶的序列如SEQ ID NO:18－20中任一所示；

(ii)步骤(1)的反应在pH为8.0-10.0的条件下进行；和

(iii)步骤(1)的反应温度为35±3℃。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述pH使用选自三乙醇胺缓冲溶液、Tris-HCl缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液的缓冲液和补加异丙胺维持。

7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，

所述转氨酶的序列如SEQ ID NO:18－20中任一所示；

所述有机溶剂为DMSO；

所述的氨基供体为异丙胺、(R)-甲基苄胺、(S)-甲基苄胺或丙氨酸；

使用三乙醇胺缓冲溶液将反应体系的pH控制在9.0-10.0；和

反应温度为35±1℃。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述氨基供体为异丙胺。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，DMSO和异丙胺的体积比为4～40：1。