[发明专利]一种神经干细胞换液系统及其用于神经干细胞培养的换液方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种更换细胞培养液的方法，特别涉及一种神经干细胞换液系统及其用于神经干细胞培养的换液方法。

背景技术

大量培养人神经干细胞主要用于防治神经退行性疾病，如帕金森氏症，老年痴呆症，脊髓损伤等病症。通常神经干细胞培养过程中需定期换液，去除部分代谢废液，然后补充等量新鲜营养液，从而保证了神经干细胞继续分裂和生长。据了解国内外最常见方法之一是直接吸弃法和离心弃液法，即将细胞培养瓶先竖立，等神经干细胞球沉淀后，轻轻吸弃上清液，再补充等量新鲜培养液，经测定去除的上清液中含有部分单个神经干细胞和小的神经干细胞球，直接造成培养过程中神经干细胞数量的损失。另一方法是离心弃液法，先将细胞培养瓶竖起，待神经干细胞球沉降后，用移液管吸取上清液转移至离心管，离心1500转/分，20分钟，弃去上清液收集沉淀的单个神经干细胞和小的神经干细胞球，输回到培养瓶中，加新鲜培养液培养，该法缺点是费时费力，而且离心沉淀液体中含有长期培养的细胞碎片组织，培养液中含有这些碎片组织影响神经干细胞的长期培养。

发明内容

本发明提供一种神经干细胞换液系统，采用该系统进行换液，在换液过程中神经干细胞或悬浮细胞不丢失，且速度快、省时、省力的优点，采用钛棒过滤方式和不锈钢滤网过滤方式去除废液。

本发明还提供一种用于神经干细胞培养的换液方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种大规模培养神经干细胞换液系统，该系统包括依次连接的细胞拦击器、废液储存瓶、无菌空气瓶和抽气泵，细胞拦击器是由钛棒滤头与不锈钢管相连而成，钛棒滤头的孔径为4.0-5.0μm。

作为优选，钛棒滤头为平顶下端弧形，平顶连接不锈钢管，钛棒滤头的长度为22mm，直径为18mm，不锈钢管长度为215mm，外径为12mm，内径为4mm，不锈钢管通过连接管与废液储存瓶相连，不锈钢管与连接管相连接的一端设有宝塔型螺纹口。该装置适用于大规模培养神经干细胞。

一种采用所述的神经干细胞换液系统进行培养中的神经干细胞或悬浮细胞换液方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

换液顺序是：竖瓶-插入钛棒滤头-抽液-补液-重新培养；

具体步骤是：将含有干细胞培养液的细胞培养瓶竖起，瓶口朝上，开盖后将神经干细胞换液系统的钛棒滤头伸进培养瓶内，抽取细胞培养瓶内需要更换掉的培养液，取出钛棒滤头，向细胞培养瓶内加入新鲜培养液，盖盖继续培养。

作为优选，钛棒滤头堵塞不能抽取时，将其伸进另一瓶新鲜的培养液中，通过正压吹气，洗去吸附滤头表面的细胞，洗下的细胞并入其他细胞培养瓶或单独培养。

一种神经干细胞换液系统，该神经干细胞换液系统包括依次相连的注射器、细胞拦击器和细胞培养瓶，细胞拦击器是内置不锈钢滤网的不锈钢管，不锈钢滤网的孔径为4.0-5.0μm；注射器的体积为100-200ml，细胞拦击器的一端与注射器的针筒头部相连，细胞拦击器的另一端通过皮管连接移液管，移液管直接插入待换液的细胞培养瓶中。该系统适合小规模培养神经干细胞的换液。

本发明采用钛棒过滤方式吸除废液，补充新鲜营养液，达到换液的目的。在换液过程中干细胞不丢失，且速度快、省事、省力的优点，采用钛棒过滤方式去除废液。

发明人原来采用直接弃液法，后来把这些弃液经过离心后，发现有很多单个神经干细胞和小的神经干细胞球。所以改用离心换液法，一次离心法换液周期需30~50分钟，一台离心机只能换取2~3瓶培养液，每瓶装量200毫升，换取量为100毫升。然而在大批量培养神经干细胞时，特别费时费人工，效率极低。因此特别设计了本发明的神经干细胞换液系统，该系统利于大规模生产，省时省人工，效率高。另外在实验室少量培养神经干细胞时，另外提供了一种简易拦击神经干细胞或漂浮细胞的神经干细胞换液系统，该系统适合实验室小规模培养神经干细胞。

本发明神经干细胞换液系统及其用于神经干细胞培养的换液方法可以缩短神经干细胞培养过程中换液时间，防止了换液过程中珍贵的神经干细胞流失，节约了人力、提高了生产力、便于工业化生产。

附图说明

图1是本发明神经干细胞换液系统的结构示意图；

图2是本发明细胞拦击器的结构示意图；

图3是本发明神经干细胞换液系统的另一种结构示意图；

图中：1抽气泵；2无菌空气瓶；3废液储存瓶；4细胞培养瓶；5细胞拦击器A；6不锈钢管；7连接管；8不锈钢滤网；9细胞拦击器B；10注射器。

具体实施方式