[发明专利]去白细胞富血小板血浆的制备方法及装置

说明书

技术领域

本发明属于血液制品技术领域，特别涉及一种血浆制品的制备方法以及用于实施该方法的离心装置。

背景技术

富血小板血浆(PRP)是一种富含血小板的血液制品，根据其中是否含有白细胞又可以大致分为富含白细胞的L-PRP和不含白细胞的P-PRP两大类。近年来，大量研究证实PRP中促进骨组织、软骨组织和肌腱组织的修复和再生的有效成分为血小板，而PRP中的白细胞不仅对于组织修复并没有促进作用；相反，白细胞可以通过释放炎症因子引发局部的免疫反应、抑制组织修复，从而降低PRP的临床疗效、提高注射部位疼痛等不良反应的发生率。因此，去白细胞富血小板血浆的制备方法是目前研究的重点和热点。

评价P-PRP的制备方法有三个主要指标：首先是白细胞清除率，清除率越高则白细胞清除越彻底，从而可以提高临床疗效、减少不良反应；其次为血小板回收率，回收率越高则血液利用度越高；再次为血小板富集度，只有PRP的起效剂量为富集度4～6倍，过低的富集度会导致效用下降，从而导致临床疗效不显著。然而，由于白细胞分布区域与血小板分布区域重合较为严重，依照目前的分离技术，要去除越多的白细胞必然导致回收越少的血小板，因此白细胞清除率和血小板回收率看似一对矛盾体。

目前临床上多使用Anitua法制备PRP，也有按照美国Biomet公司 富血小板血浆制备套装提供的方法制备PRP，但是制备得到的PRP的各项指标均不理想。

发明内容

本发明的目的在于提供一种去白细胞富血小板血浆的制备方法，以同时实现富血小板血浆制备过程中的白细胞去除和血小板富集。

本发明的另一目的在于提供一种用于实施上述去白细胞富血小板血浆的制备方法的离心装置，以提高制备效率和减少样本污染。

为解决上述技术问题，本发明的实施方式所提供的去白细胞富血小板血浆的制备方法，包含下述步骤：

(i)样本准备：分别抽取抗凝剂和血液，充分混匀，得到待分离的全血；

(ii)第一次离心：取上述待分离的全血在130g～180g的离心速度下离心10～20分钟，形成自下而上分为三层的离心液，上层离心液的体积占所述全血体积的1/3～2/3，获取所述上层离心液，即为血小板和血浆成分层；

(iii)第二次离心：取上述获取的血小板和血浆成分层在250～400g的离心速度下离心10～20分钟，形成底部血小板沉积和血浆上清液；抽取部分血浆上清液，使用剩余的血浆上清液重悬血小板沉积，所述剩余的血浆上清液的体积占全血体积的1/15～1/5，即制备得到去白细胞富血小板血浆。

在本发明的实施方式所提供的制备方法中，通过两次离心操作分别实现了白细胞的去除和血小板的富集。具体来说，在第一次离心之后，获得了分为三层的离心液，自下而上分别为红色、无色和淡黄色，其中：(1)红色为红细胞层，约占总体积的40～65％，其主要成分为红细胞，此外还含有少量的白细胞和极少量血小板，约占红细胞总数的100％、白细胞总数的10～20％、血小板总数的不足10％；(2)淡黄色层为血小板层和血浆层，约占总体积的35～60％，不含白细胞和红细胞，约占血小板总数的50～90％；(3)无色的为白细胞层，其主要成分为白细胞，该层与上层的血小板层和血浆之间 存在重合现象，白细胞层和重合层约占总体积的5％；白细胞层以及与白细胞层重合的血小板层中的白细胞约占80～90％，血小板占总数的10～50％。本发明在第一次离心之后获取上层离心液(即血小板和血浆层)，又对该上层成分进行了第二次离心操作。此次离心操作之后，绝大多数血小板均沉积于离心管底，上清液为含有血小板不超过5％的血浆；抽取并抛弃多余的血浆，使用剩余的少量血浆重悬血小板即制备得到去白细胞富血小板血浆。