[发明专利]抗牛支原体蛋白Md‑UF1

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，具有涉及抗牛支原体蛋白基因Md-UF1、抗牛支原体蛋白Md-UF1及其在制备治疗牛支原体引起传染性疾病药物方面的应用。

背景技术

牛支原体（Mycoplasma bovis，M.bovis）是感染牛的致病性病原体，于1961年首次从患有乳房炎的病牛中分离出来，1976年被报道与牛呼吸系统疾病有关。近年来，该病原引起的疾病已在我国普遍发生，给我国畜牧养殖业造成了巨大的经济损失。

目前，仅有美国具有商业化的疫苗用于预防牛支原体的感染，而其它国家均采用抗菌药物对其进行治疗，由于抗生素的广泛使用，甚至滥用，使M.bovis出现耐药株，且耐药率较高，其产生耐药性的直接后果不仅给控制和治疗该病带来困难，也加剧了抗生素在牛体内的残留，为此，研制新型抗M.bovis药物已迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的是提供一种家蝇抗菌蛋白Md-UF1及编码该蛋白的基因。

抗菌蛋白Md-UF1基因，其碱基序列如序列表SEQ ID NO.1所示；

抗菌蛋白Md-UF1，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示；

抗菌蛋白Md-UF1基因的制备方法，它包括：

1）提家蝇幼虫总RNA，分离提纯mRNA，反转录合成cDNA；

2）以cDNA为模板，用引物：

P1 5'-GCGAATTCATGGGAGTCTTCA-3' ；

P2 5'-CGCAGCTCGAGTTACTGAATATAAA-3' ；

扩增。

抗菌蛋白Md-UF1表达载体，它是在表达载体上插入了如序列表SEQ ID NO.1所示的基因。

所述的表达载体为pET-32a。

表达抗菌蛋白Md-UF1的工程菌，它转染了上述的抗菌蛋白Md-UF1表达载体的大肠杆菌。

抗菌蛋白Md-UF1在制备治疗牛支原体引起的疾病药物方面的应用。

本发明提供了抗牛支原体蛋白Md-UF1，它是用肺炎支原体诱导家蝇幼虫，构建了抑制性消减文库，在抑制性消减文库中筛选，得到了抗牛支原体蛋白基因Md-UF1，表达了抗牛支原体蛋白Md-UF1，经实验证明，对牛支原体有较强的抑制作用。

附图说明

图1肺炎支原体“煎蛋样”菌落；

图2肺炎支原体16S rRNA基因的扩增结果；其中，M: DL2000; 1-3:16S rRNA PCR产物;4:阳性对照；

图3 Md-UF1基因的扩增结果；

图4纯化的抗牛支原体蛋白Md-UF1，SDS-PAGE分析结果。

具体实施方式

实施例1肺炎支原体诱导家蝇幼虫后抑制性消减文库的构建及抗牛支原体蛋白基因筛选

一、诱导菌株肺炎支原体分离鉴定

采集自患肺炎的猪的肺脏病灶，按支原体分离培养程序分离培养，经菌落形态学观察，分子生物学方法对分离菌进行鉴定，结果显示，分离菌菌落在40倍普通光学显微镜下观察其菌落形态具有“油煎蛋”样典型特征（见图1）,初步证明所分离菌为支原体。

采用肺炎支原体 16S rRNA全长引物对其进行鉴定（见表1），扩增出约1.5kb的片段（见图2），与预期片段大小相符，该基因片段测序后使用BLAST对其碱基序列进行分析，其结果显示，所分离菌株的16S rRNA相应序列与Genbank登陆的肺炎支原体同源性为99%，进一步证明所分离菌株为肺炎支原体。

表1 引物序列

二、肺炎支原体诱导家蝇幼虫后抑制性消减文库的构建