[发明专利]一种应用于观赏鱼的复合芽孢杆菌微生物净水剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物应用技术领域，尤其是涉及一种应用于观赏鱼的、含有凝结芽孢杆菌复合芽孢杆菌微生物净水剂及其应用。

背景技术

随着生活水平不断提高，观赏鱼已进入日常生活，给人们带来欢乐。家庭养鱼过程中，水体经常出现浑浊甚至发绿发黑等现象，严重时直接导致观赏鱼死亡。引起这种现象的原因在于未被食用的饵料和观赏鱼排泄物污染了水体。

目前，人们通常采用定期更换新鲜水或者使用含有光合细菌(PSB)的微生物净水剂产品来保持水体干净。

定期更换新鲜水固然能维持观赏鱼养殖水质，但替换出的脏水会被排入下水道或者进入环境，形成新的污染源。

PSB是一类光能厌氧性微生物，能以污水中的有机物为营养进行光合作用，从而净化水质。农林生介绍了一种以光合菌群为主的复合微生物净水剂在观赏鱼养殖中的有益效果(复合微生物净水剂对观赏鱼水族箱养殖水质的影响试验，广西农业科学，2008年第39卷第6期)。PSB有一个缺点，即保质期不长，出厂后短期内必须用完，否则微生物大量死亡。因此，在使用含有光合细菌(PSB)的微生物净水剂产品时，经常会发现产品前期有效，但过了两三个月以后效果减弱甚至没有效果。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本申请人提供了一种应用于观赏鱼的、含有凝结芽孢杆菌的复合芽孢杆菌微生物净水剂及其应用。本发明可降解观赏鱼养殖水体中的底部残饵和排泄物，实现净化水体，节省换水人工并减少换水带来的环境污染问题；产品保质期1年，利于日常采购和使用。

本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种应用于观赏鱼的复合芽孢杆菌微生物净水剂，由以下菌种组成：

所述凝结芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)ZS-007，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2015273。

本发明还提供了一种应用于观赏鱼的复合芽孢杆菌微生物净水剂的应用，将复合芽孢杆菌微生物净水剂直接投入水体，用量0.1-0.5g/m³水体，每8～12天使用一次。

1、凝结芽孢杆菌的筛选

从江苏无锡马山某奶牛养殖场附近的土壤样品称取2g，加入98ml无菌生理盐水，80℃热处理10min后，在37℃摇床上120rpm条件下振荡20min，吸取上清液1ml加入LB培养基中稀释涂布进行菌株分离。通过对菌株进行形态学观察、生理生化实验、16S rDNA分析等手段有效而准确的确定菌种的属种。

最终得到编号为ZS-007的菌种，鉴定为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)。

ZS-007于2015年5月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2015273。保藏单位地址为中国.武汉.武汉大学。

2、凝结芽孢杆菌高密度发酵

(1)菌种活化

将凝结芽孢杆菌菌种接种至营养琼脂斜面培养基上，25-37℃下培养24-48hr；然后划线转接于营养琼脂茄子瓶斜面，25-37℃下培养24-48hr。

营养琼脂斜面培养基及营养琼脂茄子瓶的组成均为：蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化钠5g/L，琼脂15-20g/L，pH7.2-7.4。

(2)摇瓶培养

将活化好的菌种接种至摇瓶中，振荡培养18-30hr。

摇瓶培养基配方：蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化钠5g/L，pH7.2-7.4。250mL摇瓶装液量为20mL，500mL摇瓶装液量为50mL。

培养条件：摇瓶转速200r/min，温度25-37℃。

(3)种子罐扩培

扩培菌种以用于后期发酵。种子罐培养基组成：蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化钠5g/L，pH7.2-7.4。种子罐体积10-1000L，装液量50-80％。

培养条件：搅拌转速180-250r/min，通气量0.5-1.0vvm，温度25-37℃，培养时间18-30hr。

(4)发酵罐发酵

以0.1％-10％的接种量将种子液接入发酵罐，发酵培养基组成：葡萄糖25g/L，蛋白胨15g/L，酵母粉10g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁0.5g/L，初始pH7.0。发酵罐体积1-50m³，装液量50-80％。