[发明专利]检测驴奶中是否含有牛奶的引物、探针组合物及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及检测驴奶(包括液态驴奶，驴奶粉及各类驴奶制品)中是否含有牛奶的引物、探针组合物、试剂盒及检测方法，属于食品安全检测分子生物学技术领域。

背景技术

目前，我国30％的婴幼儿得不到母乳喂养，也得不到趋近母乳成份和含有母乳重要营养物质配方的奶喂养。科学研究表明，驴奶和人奶营养成分非常接近，曾有法国妈妈养驴育子，又有意大利妈妈养驴救子一说。驴奶对人体的心、胃、脾、肺、肝、前列腺等多种器官有保健作用，其营养成分比例接近人乳的99％。驴奶中硒元素含量极高，每一百毫升达10μg，是牛奶的5.2倍，属天然富硒食品。驴奶中维生素C的含量高，是牛奶的4.75倍，接近人乳。驴奶中乳清蛋白的含量高，占总蛋白含量的64.3％，人乳为71％，比牛奶高2倍以上，较牛奶更易被人体吸收。驴奶中富含有人体必需的脂肪酸(亚油酸和亚麻酸)，占脂肪总量的30.7％，是牛奶的9倍。驴奶的药用价值也很高，在唐朝药王孙思邈《千金食治》中记载：“驴奶：味甘、性寒、主治肺咳、消渴、黄疸、小儿惊痫、妇经痛、急性心绞痛、风热赤眼，具滋阴活血功效”。明朝医圣李时珍《本草纲目》中记载：“驴乳味甘、冷利、无毒、主治小儿热急黄等，多服便利、疗大热、止消渴、小儿热、急惊邪赤热，小儿痫疾，频热炊之，治气邪、解小儿热毒、不生痘疹”。因此，任何体质的婴儿，特别是胃肠较弱、体质较差的婴儿都可以接受驴奶。驴奶富含“上皮细胞生长因子”(国际上简称EGF，EGF因子有神奇的修复鼻腔气管粘膜作用)，医学专家研究认为：患有支气管炎、肺炎、肺结核病人，治疗期间喝驴奶有辅助治疗效果。驴奶中所含的芋碱酸可养颜美白肌肤，在古代就被称为“皇家珍品，乳中新贵”。

鉴于驴奶较高的营养价值和药用价值，近年来驴奶制品的价格远高于普通牛奶制品，其市场需求量更是逐年上升；但由于内地人食肉和熬皮制胶等需要，驴存栏量却逐年降低，使得驴奶成为稀有物种资源。在市场利益的驱动下，一些没有驴奶资源的企业也纷纷推出了驴奶制品，一时间市场上真假驴奶制品难辨。有些企业在驴奶中掺入牛奶，冒充驴奶，严重侵害了消费者的利益。我国乳品工业与发达国家的差距仍然十分明显，奶及其制品质量参差不齐，与国际水平还有一段明显的距离，尤其是我国奶、奶粉及奶制品中掺假现象非常普遍，掺假手段多种多样，不断变换，而我国掺假检测环节十分薄弱。在这样严峻的情况下，为使我国奶业得到健康的发展，迫切需要解决上述问题，需要对大量的奶，奶粉及奶制品等进行实时快速的掺假测定。因此，开发一种快速有效的检测掺假问题的试剂盒势在必行。

现有技术中，常用的检测技术主要有：感官鉴评、传统实验、比色法、近红外光谱技术检测、ELISA法等。这些方法存在灵敏度低、准确率不高、重复性差等缺点。以聚合酶链式反应(PCR)为基础的技术已逐步成为了食品中动物源性成分种属鉴定的核心方法。近年来实时荧光PCR技术的飞速发展，大大提高了食品中物种鉴别的效率和灵敏度，并使得成分含量的定量溯源成为可能。现有技术中尚未见到有关检测驴奶中是否含有牛奶成分的荧光定量PCR检测方法的报道，因此，建立一种带有内参基因的驴奶和牛奶源性成分实时荧光PCR检测方法，对驴奶、牛奶及奶制品安全的快速监管具有重要的创新性实践意义。

发明内容

针对上述现有技术，

本发明从驴、牛的线粒体基因组DNA(mtDNA)的16SrRNA基因序列的物种特异性出发，探索并完善了一种快速准确检测驴奶(包括液态驴奶，驴奶粉及各类驴奶制品)中是否含有牛奶的引物、探针组合物、试剂盒及检测方法，该方法特异性强，灵敏度高，检测结果准确可靠，对驴奶、牛奶及奶制品安全的快速监管具有重要的意义。

本发明是通过以下技术方案实现的：

检测驴奶中是否含有牛奶的引物、探针组合物，包括以下引物和探针，其核苷酸序列如下(如SEQ ID NO.1～9所示)：

(1)引物

①驴特异引物：

LF：5’-CGTGAAGAGGCGGGAATAACC-3’；

LR：5’-ATTATGTATTTTGACTGGTTAGTCTAG-3’；

②牛奶特异引物：

NF：5’-ACTAACCAACCCAAAGAGAATAAATTT-3’；

NR：5’-GATTTGACTTGTGGGTCTAGTC-3’；

③内参引物：

16SF:5’-ACCGTTACCGAGTCCAGGTG-3’；

16SR:5’-TTCGGACTCGATCAGAGCAC-3’；