[发明专利]一种卵白蛋白酶解制备ACE抑制肽的方法

说明书

技术领域

    本发明属于ACE抑制肽制备领域，具体涉及一种卵白蛋白酶解制备ACE抑制肽的方法。

背景技术

高血压是以动脉收缩压或舒张压升高为特征的临床综合症。人群中导致高血压病症的原因有很多，且比较复杂，其中许多的研究认为体内血管紧张素转化酶的调节作用是引起高血压最主要的原因之一。现今，我国高血压患者人数已有2亿之多，患病率也在持续上升。一般传统的抗血压药会对人的机体产生各种毒副作用，但食源性ACE抑制肽与这些降压药物相比较，几乎没有眩晕、低热、白细胞减少等中毒现象，其不仅具有较强的降压活性，还具有良好的食用安全性。现在，我们已经能够通过对天然肽的提取、化学合成、酶解食物蛋白制备等多种途径来获得ACE抑制肽。其中食源性ACE抑制肽的降血压效果具有温和、持久、专一、安全性较高等优点，且正常血压几乎没有影响。

研究发现，通过抑制血管紧张素转化酶活性可有效治疗高血压病症，部分活性肽含有抑制ACE活性的物质。自S.H.Ferreira首次在南美茅头蝮蛇毒液中发现具有抑制血管紧张素转化酶活性的活性肽以来，许多动植物蛋白资源中的天然肽不断被提取分离出来，并验证具有ACE抑制活性。在生物体内ACE对血压的调节起关键作用：①使具有舒张血管作用的舒缓激肽被降解并导致其失活；②催化无活性的血管紧张素Ⅰ转化成具有强烈收缩血管作用的血管紧张素Ⅱ。鸡蛋清中含有丰富的蛋白质资源（达12%，其中卵白蛋白占54%），且与人体的蛋白模式相似，容易被人体全面吸收，同时其酶解产物具有抗氧化、抑菌和抑制ACE活性等作用。

现今对食源性ACE的研究发展非常迅速，但是对卵白蛋白ACE抑制肽的研究还比较鲜见。卵白蛋白为磷酸糖蛋白，有高度二级结构的球型结构，相对分子质量为43.0kDa，等电点为4.5，50%以上为疏水氨基酸残基，含3.5%糖基及埋藏于疏水中心内部的1个二硫键、4个自由巯基，巯基均包埋在蛋白质的疏水核心部分。卵白蛋白相对有序度较高，结构较为致密，自然卵白蛋白在储运过程中会转化为热稳定性的S-卵白蛋白构型。卵白蛋白的结构独特性决定其制备活性肽时呈现出与其他常用食品蛋白不同的机理与条件。随着蛋品深加工、综合利用的研究深入，鸡蛋生物活性成分的多级联产提纯技术日趋发展与完善，卵白蛋白作为鸡蛋清中含量最大的蛋白组分，是各种方法提纯其它功能活性成分时必须首先分离的对象，采用生物、物理或化学方法利用卵白蛋白，对促进其高效综合利用具有重要意义。食源性ACE抑制肽具有很好的开发前景，本发明采用卵白蛋白作为原料，探讨以胃蛋白酶酶解来制备卵白蛋白ACE抑制肽的工艺，为充分合理的开发利用这种优质资源提供基础数据参考。

发明内容

本发明的目的在于提供一种卵白蛋白酶解制备ACE抑制肽的方法，旨在解决现有技术提供的制备ACE抑制剂的来源狭窄，制备过程繁琐，ACE抑制剂类药物副作用大的问题。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种卵白蛋白酶解制备ACE抑制肽的方法，所述方法包括如下步骤：

（1）将卵白蛋白纯品溶解于去离子水中，配置成蛋白溶液；

（2）蛋白液置于90℃下恒温水浴锅中加热10min，

（3）调节pH值，加入胃蛋白酶混合均匀，在恒温水浴锅中进行酶解反应，酶解条件为：pH2.5，底物质量分数5.2g/100mL，加酶量14000U/g，酶解时间250min，酶解温度30℃；

（3）将酶解液置于90℃恒温水浴锅中灭酶15min；

（4）取出，5000r/min离心15min，收集上清液。

采用聚乙二醇沉淀和等电点沉淀结合的方法提取卵白蛋白。选择新鲜的鸡蛋，将蛋白与蛋黄分离，蛋白与去离子水按照1:1的比例稀释，在25℃下磁力搅拌10min，用纱布过滤，然后边磁力搅拌，边缓慢加入PEG8000 (用量为混合液质量分数15% )，加完后搅拌1-2 h。混合液在5000r/min的条件下离心20 min，取上清液边磁力搅拌，边用1mol/L HCl调pH值至4.5，静置30 min后产生沉淀，收集沉淀即为卵白蛋白纯品，冷冻干燥后冷藏备用。

本发明的优点在于：采用卵白蛋白为原料，以胃蛋白酶法酶解制备ACE抑制肽。酶解制备卵白蛋白ACE抑制肽最佳工艺条件为：pH2.5，底物质量分数5.2g/100mL，加酶量14000U/g，酶解时间250min，酶解温度30℃。在此条件下，ACE抑制率可达70.55%。