[发明专利]注射用三重霉素中三组分的HPLC测定法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分析方法，具体涉及一种注射用三重霉素中三组分的HPLC测定法。

背景技术

注射用三重霉素，又名强化苄星青霉素，为苄星青霉素、普鲁卡因青霉素、青霉素钠按国际单位比2∶1∶1混合的无菌粉末。苄星青霉素为青霉素的二苄基乙二胺盐，普鲁卡因青霉素为青霉素的普鲁卡因盐，二者均为青霉素长效品种，抗菌活性成分为青霉素，肌注后慢慢游离出青霉素，使血浓度维持时间延长，显示长效作用。三者混合使其具有长期，中期和即时起效的优势，可以维持1-4周血液中的有效浓度。该复方制剂国内未见分析报道。目前，对注射用三重霉素中苄星青霉素、普鲁卡因青霉素、青霉素钠的检测方法主要是通过HPLC法分别单独测定，存在测定步骤繁琐，测定时间长的缺陷。

有鉴于此，需要发明一种简单、快速的注射用三重霉素中三组分的HPLC测定法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种注射用三重霉素中三组分的HPLC测定法，利用相同的液相条件可以同时检测三组分的含量，具备方法简便、准确、稳定性好的特点。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种注射用三重霉素中三组分的HPLC测定法，其具体包括如下步骤：

1)对照品溶液的配制

配制含有普鲁卡因，二苄基乙二胺和青霉素工作对照品的对照品溶液；

2)供试品溶液的配制

配制供试品注射用三重霉素的供试品溶液；

3)色谱条件

色谱柱：C₁₈反相色谱柱，流动相：体积比为81∶19的缓冲盐溶液-乙腈，所述缓冲盐溶液内含0.21mol/L磷酸二氢钾和0.16％的三乙胺，pH值为5.6，流速：1.0ml/min，检测波长：215nm，进样量：10μl；

4)含量计算方法

按外标法以峰面积计算供试品中普鲁卡因、二苄基乙二胺和青霉素的含量。

作为本发明进一步的改进，所述步骤1)中对照品溶液的配制方法如下：

称取普鲁卡因工作对照品12mg，二苄基乙二胺对照品20mg和青霉素工作品80mg，置100ml量瓶中，加乙腈10ml振摇使均匀分散后，加甲醇10ml充分振摇使溶解，用磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，所述磷酸盐缓冲液的配制方法为：取磷酸二氢钾6.8g和磷酸氢二钾1.14g于1000ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

作为本发明进一步的改进，所述步骤2)中供试品溶液的配制方法如下：

称取供试品50mg，置50ml量瓶中，加乙腈10ml振摇使均匀分散后，加甲醇10ml充分振摇使溶解，立即用磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，所述磷酸盐缓冲液的配制方法为：取磷酸二氢钾6.8g和磷酸氢二钾1.14g于1000ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

作为本发明进一步的改进，所述步骤4)计算供试品中普鲁卡因、二苄基乙二胺和青霉素的含量后，通过以下方法计算苄星青霉素、普鲁卡因青霉素和青霉素钠的效价：

按每1mg的青霉素相当于1780青霉素单位计算供试品中普鲁卡因青霉素、苄星青霉素、青霉素钠的效价，每1mg含青霉素总效价＝青霉素含量×1780，苄星青霉素效价＝二苄基乙二胺含量×4953，普鲁卡因青霉素效价＝普鲁卡因含量×2519，青霉素钠效价＝青霉素总效价-苄星青霉素效价-普鲁卡因青霉素效价。

作为本发明进一步的改进，所述色谱柱为封尾完全完全的C₁₈色谱柱。

作为本发明进一步的改进，所述步骤3)中缓冲盐溶液通过氢氧化钾调pH至5.6。